Autor: Heiter Boness heiter@ufba.br

Orientador: Prof. Dr. Frederico Guaré Cruz

 Citotoxicidade da 4-n-propilcumarina mammea B/BA isolada de Kielmeyera argentea contra células U251 de

glioblastoma humano

UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIAINSTITUTO DE QUÍMICADepartamento de Química OrgânicaGrupo de Estudo de Substâncias Naturais Orgânicas - GESNAT

Introdução v

Glioblastoma multiforme é um tumor maligno primário do SNC

classificado pela OMS como astrocitoma grau IV

Glioblastoma observado através de Ressonância Magnética por Imagem

Introdução v

Glioblastoma multiforme

Tratamento: cirurgia, radioterapia e quimioterapia

Sobrevida: 12 meses

N

N

N

NN

O

NH2O

temozolomida (Temodal®) Custo total > R$20.000,00

K. coriacea

(pau-santo)

K. variabilis

(malva-do-campo)

Gênero Kielmeyera (Calophyllaceae):

endêmico da América do Sul;

agrega cerca de 40 espécies.

No Brasil, ocorrência destaca-se nos biomas Cerrado e Mata Atlântica

Introdução v

Química do gênero Kielmeyera

O

O

OH

O

OH

Gottlieb et al. Phytochemistry, (8) 665-666, 1969

OO O

OHO

Nogueira et al. Biochem. Syst. and Eco., (36) 921–924, 2009

Xantonas4-Alquil e 4-fenilcumarinas

O

O

O

OH

O

Almeida et al. Tetrahedron Letters, (52) 7108-7112, 2011

Derivados poliprenilados do floroglucinol

OH

OMe

OMe

Bifenilas

Cortez et al., Phytochemistry, (47), 1367-1374, 1998

Introdução v

Kielmeyera argentea

O O

O

OH

O

O

O

O O

O

OH

O

O

O

O

OHO

OO

O

OO

OHO

OO

O

O

Cruz et al. Phytochemistry, (48) 4, 703-706, 1998

Constituintes químicos isolados a partir do caule de K. argentea

Introdução v

As 4-alquil e 4-fenilcumarinas

O O

OH

OH

O

1'

2

4a61´´

8a

1'''

1'

2

4a6

1´´

8a

1'''

O O

OH

OH

O

Introdução v

GUILET et al., Journal of Nature Products, 64, 563-568, 2001

Linhagem de células humanas KB

O

O

OH O

O R

OH

O

OH

O O

O

R

OH

RED50 = 9 μg/mL

ED50 = 15 μg/mL

ED50 = 6 μg/mL

ED50 = 5 μg/mL

Calophyllum dispar

Atividade citotóxica v

YANG et al., Journal Planta Médica, 71, 852-860, 2005

O

OH

OH O

O

O

O

O

OH

OH O

O

O

O

Linhagens de células do câncer de colón

Mammea americana

14,2 μMSW-480

HT-29

HCT-116

12,3 μM

11,5 μM

14,7 μM

12,5 μM

12,0 μM

IC50 IC50

Atividade citotóxica v

O

OH

OH O

O

REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004

Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251

IC50 = 0,59 μM

O

O

OH O

O

OH

IC50 > 25 μM

Calophyllum brasiliense

Atividade citotóxica v

REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004

Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251

Calophyllum brasiliense

OOH O

O R

OH

R = mammea C/OA

mammea C/OBR =

R = mammea B/BA

mammea B/BBR =

OOH O

O R

OH

R = mammea B/BA ciclo F

mammea B/BB ciclo FR =

OOH O

O R

OOH

IC50 = 1,47 μMIC50 = 1,85 μM

IC50 = 9,4 μM

Atividade citotóxica v

Objetivos v

Estudar a química das raízes de Kielmeyera argentea;

avaliar a citotoxicidade in vitro das 4-alquil e 4-fenilcumarinas

isoladas de K. argentea frente a células de glioblastoma humano

da linhagem U251.

Parte experimental : coleta v

Espécime de K. argentea e Parque Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA

Um espécime de K. argentea foi coletado na restinga do Parque Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA e identificado pela botânica Msc. Maria Lenise S. Guedes (IBIO-UFBA)

Procedimento experimental para o isolamento e purificação das substâncias presentes no extrato hexânico das raízes de K. argentea

Parte experimental : isolamento e purificação v

RMN Varian Inova 500

Técnicas de RMN de 1H e 13C uni- e bidimensionais

Parte experimental : análise espectrocópica v

Determinação estrutural: substância 1 v

15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0Chemical Shift (ppm)

15.549.743.963.791.632.692.832.781.271.090.970.95

Espectro de RMN de 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1

15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0Chemical Shift (ppm)

15.549.743.963.791.632.692.832.781.271.090.970.95

Espectro de RMN 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1

7-OH

H-3

5-OH

e

e

Determinação estrutural: substância 1 v

2.7 2.6 2.5 2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6Chemical Shift (ppm)

0.99

831.

0154

1.03

051.

0429

1.05

64

1.62

611.

6406

1.65

511.

6707

1.68

521.

7003

1.84

451.

84711.89

591.

8974

2.25

132.26

482.27

822.

2912

2.30

472.

3182

2.33

17

Ampliação do espectro de RMN 1H (região entre δ 0 - 2,8) da substância 1

5.5 5.4 5.3 5.2 5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 2.9 2.8Chemical Shift (ppm)

2.92

522.

9268

2.94

082.

9423

2.95

582.

9574

3.17

373.

1872

3.50

533.

5198

5.23

455.

2490

5.26

36

-CH -CH2

2 CH3

-CH2

-CH

2 CH3

-CH2 -CH2

-CH3

O

OH

OH O

O

mammea B/BA

Determinação estrutural: substância 1 v

Substâncias isoladas das raízes de K. argentea v

O

O

OH O

O

OH

O

OH

OH O

O

O OOH

OH

O

1

3

O OOH

OH

O

2

4

Avaliação da atividade citotóxica v

Ensaio in vitro utilizando células de glioblastoma

humano da linhagem U251

Condições de cultivos: 37 °C, 5% CO2, 72 h

A substância testada foi solubilizada em DMSO

Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular (LabNq) - ICS - UFBA

Avaliação da viabilidade celular:

nível de redução do MTT

Leitura a 540 nm

EC H EC

NAD+NADH

Formazan

N

NN

N

N

S

H3C

H3C

MTT

N

NN

N

N

S

H3C

H3CH

Avaliação da atividade citotóxica v

Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA

para células U251 de glioblastoma humano

mammea B/BA

EC50 = 6,6 µM

O

OH

OH O

O

Avaliação da atividade citotóxica v

Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA

para células U251 de glioblastoma humano

Gráfico 2. Viabilidade celular após tratamento com a

temozolomida: sensibilidade somente a partir de 30 µM

mammea B/BA

EC50 = 6,6 µM

O

OH

OH O

O

Considerações finais v

A 4-n-propilcumarina mammea B/BA apresentou

potencial atividade citotóxica in vitro contra células de

glioblastoma humano da linhagem U251. Em continuidade a este

trabalho, pretende-se avaliar também a citotoxicidade das demais

4-alquil e 4-fenilcumarinas isoladas das raízes de K. argentea.

Agradecimentos v

LabNq