MENGHITUNG MIKROORGANISME DENGAN TEKNIK ANGKA LEMPENG
VERONICA RINI2011210255Kelas B
LABORATORIUM MIKROBIOLOGIFAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS
PANCASILAJAKARTA 8 OKTOBER 2012
BAB I PENDAHULUANLatar belakangJumlah kematian sel pada akhirnya
akan melampaui jumlah sel baru yang terbentuk dan populasi sel
memasuki fase kematian atau fase penurunan. Fase ini berlanjut
samapi populasi menyusut menjadi fraksi kecil atau seluruh populasi
mati. Beberapa spesies melalui seluruh rangkaian fase hanya dalam
beberapa hari, tetapi spesies yang lain masih menyisakan sel yang
dapat bertahan dalam jumlah yang sangat kecil. Pertumbuhan bakteri
dapat diukur dengan menghitung jumlah sel dengan mengukur massa
total populasi yang biasanya sebandiing dengan jumlah sel. Besarnya
populasi mikroorganisme dapat menentukan kualitas suatu produk,
menentukan tata guna suatu sumber daya, menentukan tingkat
kesuburan suatu lahan dan lain-lain. Dan mikroorganisme merupakan
salah satu makhluk hidup yang hanya dapat dilihat dengan bantuan
mikroskop. Karena ukurannya yang sangat kecil, maka sukar sekali
untuk menghitung mikroorganisme. Pada pengujian kali ini akan
dilakukan perhitungan terhadap mikroorganisme , setelah kita
mempelajari dan mempraktikkan cara-cara menanam, mengisolasi, dan
mengidentifikasi mikroorganisme pada praktikum yang sebelumnya.
Dari pengujian kali ini kita juga dapat mengetahui kecepatan
reproduksi dari mikroba serta menentukan tingkat patogenitas maupun
pencemaran yang diakibatkan oleh cemaran mikroba dalam sampel yang
dianalisis. Ada beberapa metode menghitung bakteri, yaitu metode
lempeng, metode langsung, metode turbidimetri, metode APM/angka
paling mungkin (MPN/Most proable Number), metode kimia serta metode
elektrik. Namun pada pengujian kali ini kita menghitung
mikroorganisme dengan teknik angka lempeng total saja.
Tujuan Pratikum 1. Mengetahui tehnik - tehnik menghitung bakteri
yang umum dilakukan dalam praktek mikrobiologi2. Melakukan teknik
teknik menghitung bakteri untuk menentukan jumlah koloni bakteri
dalam suatu biakan atau sampel3. Melakukan teknik seri pengenceran
agar lempeng / angka lmpeng total untuk menghitung jumlah mikroba
viabel4. Melakukan teknik perhitungan bakteri dengan merode Most
Probable Numbering
Manfaat pratikumDari pengujian kali ini yaitu menghitung jumlah
mikroorganisme dengan teknik angka lempeng total, kita dapat
mempelajari suatu jenis koloni dan sifat mikroorganisme tersebut.
Dan dengan pengujian kali ini kita dapat mengetahui kecepatan
reproduksi dari suatu mikroba dan kita juga dapat mengetahui
tingkat patogenitas dari mikroba tersebut. Dari teknik yang kita
lakukan di pengujian kali ini,kita juga dapat menentukan banyaknya
mikroba dalam suatu bahan, sehinnga kita dapat mengetahui sampai
seberapa jauh bahan itu tercemar oleh mikroba. Kita juga dapat
mengetahui secara spesifik kemampuan mikroorganisme untuk melakukan
pertumbuhan, sehingga dapat dimanfaatkan dalam bidang farmasi dan
kita dapat mengetahui dan memahami cara perhitungan kuantitas
mikroorganisme pada suatu sampel tertentu.
BAB IISTUDI PUSTAKAA. STUDI PUSTAKADi alam terdapat banyak
mikroorganisme yang hidup. Mikroorganisme yang terdapat di alam
tersebut terdapat dalam bentuk kumpulan massa sel/ koloni. Untuk
mempelajari suatu jenis koloni dan sifat mikroorganisme tersebut,
kita memerlukan teknik pembiakan mikroorganisme terlebih dahulu.
Setelah di biakan, kita perlu menghitung atau menentukan banyaknya
mikroba untuk mengetahui seberapa jauh sampel itu tercemar oleh
mikroba. Menghitung jumlah total tanpa merinci kelompok atau jenis
disebut Enumerasi. Metoda yang digunakan untuk menghitung jumlah
mikroorganisme bermacam-macam dengan tingkat ketelitian dan
peruntukan yang berbeda. Metoda pengenceran lempeng tuang,
digunakan untuk mengetahui perkiraan jumlah sel dengan anggapan
satu koloni berasal dari satu sel. Enumerasi dengan metoda ini
memerlukan keterampilan dan kecerdasan yang sungguh-sungguh
(Nurhayati dan Pingkan, 1993). Pada metoda pengenceran cawan tuang,
cawan yang dipilih untuk menghitungkan koloni adalah yang
mengandung 30-300 koloni.Kuantitasi mikroba menunjukan jumlah
koloni yang mampu di bentuk oleh mikroba tertentu. Beberapa koloni
bakteri ini, bagi tubuh manusia akan menyebabkan penyakit. Seteril
dari bakteri untuk maknan terutama minuman, sangat perlu di ketahui
demi menjaga kesehatan. Air minum dari berbagai tempat mempunyai
jenis-jenis bakteri yang tidak sama untuk air minum hasil
penyulingan diharapkan sudah terbebas dari bakteri (Dwidjoseputro,
1994). Pertumbuhan sering kali dinyatakan secara singkat sebagai
kemampuan untuk menghasilkan 2 sel baru dan hidup. Sel dikatakan
hidup bila dapat menghasilkan sel baru. Bila tidak mempunyai
kemampuan ini lagi, Maka sel dinyatakan tidak hidup lagi atau mati.
Analisis pertumbuhan bakteri dapat dilakukan dengan beberapa cara
yaitu, membandingkan jumlah sel, berat kering, konsentrasi protein
atau nitrogen dan kekeruhan (Dwidjoseputro, 1994).Perhitungan
jumlah mikroba dapat dilakukan dengan perhitungan langsung maupun
tidak langsung. Perhitungan secara langsung dapat mengetahui
beberapa jumlah mikroorganisme pada suatu bahan, pada suatu saat
tertentu tanpa memberikan perlakuann terlebih dahulu, sedangkan
jumlah mikroorganisme yang diketahui dari cara tidak langsung
terlebih dahulu harus memberikan perlakuan tertentu sebelum
dilakukan perhitungan. Perhitungan secara langsung dapat dilakukan
dengan beberapa cara antara lain adalah memebuat preparat dari
suatu bahan (preparat sederhana di warnai atau tidak di warnai) dan
penggunaan ruang hitung (counting chamber), sedangkan perhitungan
cara tidak langsung hanya untuk mengetahui jumlah mikroorganisme
dalam suatu bahan yang masih hidup saja. (Dwidjoseputro,
1994).Perhitungan secara tidak langsung didasarkan pada
kekeruhan,aktivitas metabolik, atau bobot kering. Menghitung jumlah
mikoroorganisme dengan mengukur aktivitas metabolik populasi
bakteri, jumlah hasil metabolisme diasumsikan tertentu,seperti asam
atau karbon dioksida, menunjukan proporsi keberadaan bakteri. Untuk
bakteri berfilamen dan kapang, metode pengukuran biasa tidak
memuaskan. Metode lempeng hitung sulit untuk mengukur peningkatan
jumlah bakteri berfilamen. Pada penghitungan Actinomycetes dan
kapang menggunakan lempeng hitung, justru jumlah spora aseksual
yang terhitung. Salah satu cara penghitungan yang lebih baik adalah
penentua bobot kering. Pada metode ini, bakteri atau kapang
dipindahkan dari media pertumbuhan, disaring untuk menghilangkan
materi pengganggu lain, dikeringkan, kemudian ditimbang.Berikut
beberapa metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah
mikroorganisme adalah metode lempeng, metode langsung, metode
turbidimetri, metode APM/angka paling nungkin,metode kimia serta
metode elektrik.1. Metode lempeng Pada metode ini dibuat seri
pengenceran suspensi bakteri ataupun sampel yang kemudian
ditanamkan pada media pertumbuhan padat yang sesuai. Prosedur
pengenceran yang benar sangat berpengaruh pada keseluruhan proses
perhitungan. Suspensi bakteri ditanamkan dengan cara disebar pada
permukaan media lempeng dalam cawan petri (cara sebar) ataupun
dengan cara dicampurkan dengan agar cair bersuhu 45-C dan dibiarkan
hingga memadat (cara tuang). Lempeng kemudian diinkubasikan selama
16-24 jam pada suhu 35-C sehingga bakteri tumbuh menjadi
koloni-koloni. Kemudian jumlah koloni bakteri tiap lempeng dihitung
dan dikalikan dengan faktor pengencerannya. Jumlah koloni yang
dinyatakan dengan angka adalah yang berkisar antara 30-300. Jika
lebih dari 300 koloni,dinyatakan dengan TNTC (too numerous to
count), dan jika kurang dari 30 dinyatakan dengan TFTC (too few to
count). Jumlah koloni dinyatakan dengan satuan cfu (colony forming
unit).Metode ini memiliki beberapa keuntungan yaitu hanya sel hidup
saja yang terhitung serta dapat memudahkan proses isolasi untuk
mendapatkan isolat murni. Kelemahan metode ini adalah membutuhkan
waktu yang lama karena adanya proses inkubasi, mengunakan peralatan
gelas yang banyak seta adanya faktor-faktor kesalahan yang sangat
mumgkin terjadi seperti kesalahan dalam pengenceran dan proses
transfer.
2. Metode langsungDengan metode ini, perhitungan bakteri dpat
dilakukan secara langsung tanpa harus menumbuhkan bakteri terlebih
dahulu dalam media pertumbuhan . sejumlah volume tertentu
pengenceran sampel diamati secara langsung di bawah mikroskop dan
dihitung jumlah sel-sel bakterinya (konsentrasi bakteri dalam
sampel). Digunakan chamber hitung khusus seperti hemositometer atau
chamber Petroff-Hausser. Kelemahan metode ini adalah sel-sel yang
hidp dan mati terhitung semua.
3. Metode turbidimetri (Turbidometric Procedure)Jika serbekas
cahaya dilewatkan melalui suatu suspensi bakteri, maka jumlah
cahaya yang ditransmisikan/diteruskan akan berkurang yang berkaitan
dengan tingkat kekeruhan suspensi tersebut. Pengukuran jumlah
cahaya yang ditransmisikan oleh suspensi mikroorganisme menggunakan
alat spektrofotometer ataupun alat optik yang lain dapat digunakan
untuk memperkirakan massa sel karena jumlah cahaya yang diabsorpsi
leh suspensi mikroorganisme tersebut sebanding dengan kepadatan
sel. Metode spektrofotometer memberikan perkiraan hasil yang akurat
dan proses yang cepat untuk menghitung berat kering atau massa
bakteri per unit volume biakan.
4. Matode Angka Paling Mungkin/ APM (Most Proable Number
Procedure/MPN)Metode angka paling mungkin adalah suatu metode
stastik berbasis teori kemungkinan/probabilitas. Dibuat seri
pengenceran suspensi bakteri bertingkat dalam sejumlah tabung
berisi media cair (biasanya digunakan 9 tabung atau 15 tabung dalam
3 kelompok tingkat pengenceran), kemudian dilihat terbentuknya
turbiditas/kekeruhan yang terjadi setelah seluruh media diinkubasi
yang menunjukan adanya pertumbuhan mikroba. Pola positif/negatif
dari hasil uji digunakan untuk memperkirakan konsentrasi bakteri
dalam sampel dengan cara membandingkan pola tersebut dengan suatu
tabel statistik probabilitas jumlah paling mungkin untuk hasil
tersebut.
5. Metode KimiaPada metode ini, jumlah sel dihitung secara tidak
langsung dengan perbandingan korelasi dari parameter-parameter yang
ada seperti hasil metabolik tertentu, jumlah konsumsi oksigen,
produksi karbon dioksida, produksi DNA, konsentrasi protein,
dll.
6. Penghitung sel elektronikCoulter counter adalah salah satu
contoh alat yang dapat dengan cepat menghitung jumlah sel-sel
tersuspensi dalam cairan penghantar yang melewati sebuah ruang di
mana terdapat aliran arus listrik. Sel-sel bersifat non-konduktor,
akan meningkatkan hambatan listrik dari cairan penghantar. Hambatan
listrik yang dihasilkan akan direkam yang berkolerasi dengan jumlah
organisme yang terdapat dalam cairan penghantar tersebut. Kelemahan
metode ini adalah tidak dapat membedakan partikel yang bersifat
inert di dalam komponen selular.
BAB IIIMETODE PENELITIAN
A. Alat dan bahanUntuk praktikum kali ini alat-alat yang
digunakan adalah tabung-tabung reaksi steril, cawan-cawan petri
steril, pipet-pipet volume steril, rak tabung reaksi, pembakar
bunsen. Dan pada pengujian kali ini digunakan suspensi bakteri
Bacillus subtillis dalam nutrient broth , nutrient agar dan
aquadest.B. Cara KerjaDalam pratikum mikrobiologi ini haruslah
bersifat aseptik dengan nyala api disekitar pembakar Bunsen. Isikan
suatu tabung dengan suspensi bakteri dan beri nomor 1 kemudian
disiapkan 4 buah tabung steril dn diberi nomor 2-7. Semua tabung
diisi oleh 9 mL aquadest. Kemudian secara aseptik, pindahkan 1 mL
suspensi bakteri ke dalam tabung nomor 2, homogenkan. Maka dalam
tabung no.2 terdapat pengenceran suspensi bakteri 1/10 untuk bahan
berupa sampel yang akan dianalisis dan telah dibuat homogenat 10-1
, langsung dipindahkan 1 mL suspensi bakteri dari tabung no.2 ke
taabung no.3. homogenkan. Maka dalam tabung no.3 terdapat
pengenceran suspensi bakteri 1/100. Demikian seterusnya sampai
tabung no.7 sehingga dalam tabung no. 8 terdapat pengeceran bakteri
1/106.Lalu siapkan 3 cawan petri setril beri nomor 1 sampai 3 dan
tuliskan konsentrasi masing-masing suspensi bakteri atau sampel
mulai 10-4 sampai dengan 10-7. Dengan pipet steril secara aseptik
pindahkan 1 mL pengenceran 10-5 ke dalam cawan petri no.1. lakukan
hal yang sama untuk pengenceran selanjutnya. Kemudian tuangkan
Nutrient agar steril bersuhu 45oC sebanyak 20mL kedalam setiap
ccawan petri. Goyongkan cawan pada permukaan meja kerja searah atau
berlawanan arah jrum jam untuk menghomogenkan campuran pengenceran
bakteri dan Nutrient Agar. Biar kan hingga memadat. Lalu inkubasi
semua cawan petri dalam inkubator bersuhu 35-37oC selam 18-24 jam
dengan posisi terbalik. Amati perubahan koloni dan hitung jumlah
koloni yang tumbuh di masing-masing perbenihan agar lempeng.
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN
kelompokCawan kepengenceranJumlah koloniJumlah mikroba per ml
sampel
B81285
28
33
B71156
26
34
B31123
221
33
Dari data yang dihasillkan, setiap hasil koloni di tiap cawan
harus berbanding 1 : 10 dengan hasil cawan sebelumnya. Dalam
kelompok B8 untuk ketiga cawan yaitu cawan 1,2, dan 3 menghasilkan
jumlah koloni yaitu 285, 8, dan 3. Data ketiga data tersebut di
lakukan pengenceran tiap cawan dibagi 1/10 dari data yang
dihasilkan. Cawan pertama 285/10 = 28,5 ; cawan kedua 8/10 = 0.8 ;
cawan ketiga 3/10 = 0,3. Dapat kita lihat perbandingan setiap cawan
tidak sesuai dengan perbandingan 1 : 10.Oleh karena data kelompok
B8 tidak didapat digunakan. Kemudian pada kelompok B7 untuk ketiga
cawan 1,2, dan 3 menghasilkan jumlah koloni yaitu 156, 6, dan 4.
Dari ketiga data tersebut dilakukan pengenceran tiap cawan dibagi
1/10 dari data yang dihasilkan. Cawan pertama 156/10 = 15,6 ; cawan
kedua 6/10 = 0,6 ; cawan ketiga 4/10 = 0,4. Dapat kita lihat
perbandingan setiap cawan tidak sesuai dengan perbandingan 1 : 10.
Oleh karena data kelompok B7 tidak didapat digunakan. Lalu pada
kelompok B3 untuk ketiga cawan 1,2, dan 3 menghasilkan jumlah
koloni yaitu 123, 21, dan 3. Dari ketiga data tersebut diakukan
pengenceran tiap cawan dibagi 1/10 dari data yang dihasilkan. Cawan
pertama 123/10 = 12,3 ; cawan kedua 21/10 = 2,1 dan cawan ketiga
3/10 = 0,3. Dari ketiga data tersebut dapat disimpulkan bahwa
ketiga data tersebut menghasilkan rentang yang jauh. Oleh karena
itu data kelompok B2dapat digunakan sebagai perkembangan mikroba.
Pada data kelompok B3 menghasilkan rata-rata sebanya 123 x
105.Terdapat gambar dari masing-masing cawan untuk membuktikan
koloni mikroba yang hidup. (LAMPIRAN)
BAB VKESIMPULAN
Dari hasil pengamatan dapat dilakukan perhitungan untuk koloni
mikroba. Data yang didapat akan diambil nilai yang mendekati
rata-rata. Dengan hasil perhitungan data yang ada dapat disimpulkan
bahwa menghitung jumlah bakteri atau mikroorganisme diperlukan
untuk mengetahui kecepatan reproduksi mikroba serta menentukan
tingkat patogenitas maupun pencemaran yang diakibatkan oleh cemaran
mikroba dalam sampel yang dianalisis.
BAB VIDAFTAR PUSTAKA
Dwidjoseputro, D. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan,
Jakarta.Pelczar, J Michael.1986.Dasar-Dasar Mikrobiologi.Universits
Indonesia.Jakarta
LAMPIRAN
Gambar B8 cawan 1
Gambar B8 cawan 2
Gambar B8 cawan 3
Gambar B7 cawan 1
Gambar B7 cawan 2
Gambar B7 cawan 3
Gambar B3 cawan 1
Gambar B3 cawan 2
Gambar B3 cawan 3
