15
Biokemi 1 – HT-11 Alkoholdehydrogenas – ADH labb Linda Helmfors [email protected] ([email protected])

Alkoholdehydrogenas – ADH labb

  • Upload
    belden

  • View
    144

  • Download
    0

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Alkoholdehydrogenas – ADH labb. Biokemi 1 – HT-11. Linda Helmfors [email protected] ( [email protected] ). Dehydrogenaser. Enzymer som katalyserar överföring av väte kallas med ett samlingsnamn för dehydrogenaser - PowerPoint PPT Presentation

Citation preview

Page 1: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

Biokemi 1 – HT-11

Alkoholdehydrogenas – ADH labb

Linda [email protected]

([email protected])

Page 2: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

2

Dehydrogenaser

• Enzymer som katalyserar överföring av väte kallas med ett samlingsnamn för dehydrogenaser

• Alkoholdehydrogenas (ADH) katalyserar oxidation av alkoholer -> aldehyder

• ADH kräver närvaro av koenzymet NAD+ för aktivitet• ADH är ett gruppspecifikt enzym. Snabbast reaktion med etanol men

även andra alkoholer fungerar

ADH NAD+

Page 3: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

3

Labben

• Blanda olika alkoholer med ADH och NAD+ • Mäta absorbansändringen• Beräkna reaktionshastigheten

Page 4: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

4

Reaktionen vi studerar

ADH-NAD+ + R-CH2OH ADH-NADH + R-CHO + H⇌ +

Page 5: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

5

Hur kan vi mäta reaktionshastigheten?

• Vi kan mäta reaktionshastigheten genom att mäta spektrofotometriskt vid 340nm

• NADH absorberar ljus till skillnad från NAD+

• 1 mol NADH 1 mol alkohol• Absorbansökningen per tidsenhet är ett mått på

reaktionshastigheten

Page 6: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

6

Reaktionshastighet

• E mättat på [S]• Allt E förekommer som [ES]

• [E]Tot = [ES]

• VMax beror av [E]

Under dessa beting mäter vi

Page 7: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

7

Absorbans jämfört med reaktionshastighet

Konstant hastighet

Överskottet substrat är slut => Reaktionen har nått jämvikt

Ger oss hastigheten i min-1 men vi vill ha µmol/min

Page 8: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

8

Beräkningar

• Lambert-Beers lag:

• A absorbansenhet

• ε ämnesspecifik konstant, här för NADH 6,22 ∙ 103 M-1 cm-1

• l strålens väg genom kyvetten i cm• c koncentration av NADH i kyvetten i M• Kan skrivas om:

Page 9: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

9

Beräkningar forts.

M/min

Detta vill vi göra om till mol/min

Skriv sedan i µmol/min i tabellen

Page 10: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

10

Laborationsredogörelse:

• Rubrik: Laborationens namn• Resultat:

• Rådata (invägda mängder, spädningar, direkta mätresultat ) tydligt redovisade, gärna i tabellform:

• Redovisade uträknade resultat baserade på mätdata – Tydligt!• Graf över reaktionshastigheten som funktion av enzymmängden

Alkohol Mängd ADH

Absorbans 1

Absorbans 2

Tid 1 Tid 2

Page 11: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

11

Laborationsredogörelse forts:

• Ifylld tabell över resultat

• Resultattolkning/Diskussion: Värdering av resultat och egna slutsatser samt svar på eventuella frågor ställda i laborationshandledningen.

• Lathund över vanliga returer kommer att sitta uppe på labb

Substrat ADH(µl)

ADH(mg)

∆A/∆t(min-1)

v(µmol/min)

v100/vetanol

Page 12: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

Kommentarer till returer - ADH

1. Beräkningarna behöver justeras

2. Grafen saknar enheter/fel enhet3. Uppdatera tabellen och grafen4. Utvecka diskussionen över resultatet

5. Redovisa beräkningarna med exempel från egna värden6. Graf saknas7. Tabell över rådata saknas

8. Diskussion saknas

Page 13: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

13

Förberedelser

• Läs labbhandledningen innan labben• Fundera över:

• Vilka data behöver vi samla in för att beräkna V?• Vad förväntar vi oss för resultat?

Page 14: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

14

Labben i korthet

1. Reaktionen utan enzym: NAD+ + EtOH, blanda -> mät2. Reaktionen med enzym: NAD+ + EtOH + ADH, blanda snabbt -

> mät3. Upprepa för reproducerbarhet4. Upprepa (2) med olika volym ADH5. Upprepa med olika alkoholer

Page 15: Alkoholdehydrogenas  – ADH labb

Vi ses på labb!