06. Sangue e Hematopoiese

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Sangue e Hematopoiese

55SANGUE

O sangue é um tipo especial de tecido conjuntivo cuja matriz extracelularse apresenta no estado líquido e flui num compartimento representado pelo

sistema circulatório, transportando oxigênio e outros nutrientes (hormônios,eletrólitos, água e resíduos do metabolismo celular). A permuta dos elemen-tos contidos no sangue com os tecidos se processa nos capilares sangüíneos,que são vasos de paredes mais simples, constituídos apenas de endotélio esua membrana basal. Em alguns capilares, o endotélio apresenta pequenosporos, podendo ser atravessado pela água, por um grande número de molé-culas hidrossolúveis e pela maioria dos íons. As substâncias lipossolúveis,como algumas vitaminas, dissolvem-se na membrana capilar e atravessam asua extensão sem passar pelos poros. O trânsito de substâncias através dasmembranas celulares ocorre por dois mecanismos: difusão e transporte ativo.

A homogeneidade do sangue é apenas aparente, pois é formado por duasfases: uma fase compreende os elementos figurados suspensos em outra faselíquida, o plasma sangüíneo com 91% de água e 9% restantes representadospelas proteínas, eletrólitos, gorduras, glicose, hormônios e numerosas outrassubstâncias.

No homem adulto, o volume total de sangue é de aproximadamente 5 litros,o que corresponde a 7% do peso corporal, sendo composto pelo plasma em55% de seu volume, sendo 2% de leucócitos e plaquetas e os 43% restantescorrespondem aos eritrócitos.

A regulação do fluxo sangüíneo nos capilares é devido às necessidades

locais dos tecidos, pois o sangue não flui num ritmo contínuo. Os esfíncte-res pré-capilares e as metarteríolas contraem e relaxam alternadamente em ci-clos de 5 a 10 vezes por minuto, sendo a concentração de oxigênio nos teci-



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dos o fator que determina o grau de abertura dos esfíncteres. Quando a con-centração de oxigênio é baixa, os esfíncteres pré-capilares permanecem abertos,aumentando o fluxo de sangue. Assim, quanto maior é a utilização de oxigêniopelos tecidos, tanto maior é o fluxo de sangue pelos seus capilares. O ritmo dacontração dos esfíncteres é próprio e independe dos batimentos cardíacos ou

da transmissão da onda de pulso do sistema arterial até a microcirculação.O sangue representa um importante sistema de defesa contra agentes in-

vasores de diversas naturezas, incluindo-se as bactérias e os agentes químicos,devido à presença de células de defesa e elementos humorais. O sangue tam-bém desempenha outras funções como o transporte de oxigênio e de outrosnutrientes, como glicose, aminoácidos, proteínas, gorduras, água, eletrólitos eelementos minerais até as várias células do organismo, além de remover odióxido de carbono e outros resíduos do metabolismo celular para detoxicaçãoou eliminação. Assim, o sangue atua no processo de detoxicação, transportee eliminação de substâncias absorvidas pelo organismo, inclusive os agentesfarmacológicos, promovendo a sua eliminação através dos pulmões, dos rins,da pele ou mesmo pelas fezes. O sangue participa também do ajuste do teorde água dos diversos compartimentos líquidos do organismo, regulando a con-centração de íons H+ mediante trocas iônicas e pela ação dos sistemas tam-pão, fundamentais ao equilíbrio ácido-básico osmótico dos líquidos teciduais,além de manter o pH dentro de limites adequados à função das enzimas eorganelas celulares. O sangue distribui os hormônios produzidos pelas glân-dulas endócrinas por todo o organismo e participa dos mecanismos de regu-lação da temperatura corporal.

Para a análise microscópica dos seus elementos é necessária a confecçãode distensões sangüíneas, onde uma gota de sangue é colocada sobre umalâmina histológica. Em seguida, com o auxílio de outra lâmina, distende-se agota de sangue sobre a lâmina. Este procedimento facilita a observação doselementos sangüíneos ao microscópio de luz (Fig. 5.1).

Freqüentemente, para visualização de tais elementos, realiza-se a colora-ção das distensões sangüíneas com corantes especiais, com base na misturade Romanowsky, que é uma mistura de corantes como a eosina, o azul-de-metileno e azures-de-metileno. Outros corantes são encontrados comercialmen-te, como Leishman, Wright e Giemsa (misturas do tipo Romanowsky).

CONSTITUIÇÃO DO SANGUE

Na matriz extracelular do sangue, denominada plasma, se encontram emsuspensão os elementos figurados (eritrócitos ou hemácias, leucócitos ouglóbulos brancos e plaquetas).

A quantidade de hemácias existente no sangue é um indicador de grandeimportância na avaliação clínica dos indivíduos. A sua expressão mais simplesé o hematócrito, que representa o porcentual de hemácias contido no sangue(Fig. 5.2). O volume de hemácias tem relação direta com a quantidade de he-

moglobina; portanto, o hematócrito é um indicador indireto da capacidade dosangue em transportar oxigênio para os tecidos. O hematócrito normal para oshomens varia de 40% a 42% e para as mulheres, de 38% a 42%. Segundo a téc-




nica de preparo do hematócrito, a centrifugação em alta velocidade de um pe-queno volume de sangue dentro de um tubo graduado permite estimar o vo-lume ocupado pelas hemácias com relação ao sangue total. Os valores normaisestão representados na Tabela 5.1.

PLASMA SANGUÍNEO

O plasma sangüíneo é a fase líquida e representa a porção não-celular dosangue. É um líquido viscoso, de tonalidade amarelo-pálido. Ao centrifugar-mos um determinado volume de sangue em um tubo de ensaio por alguns mi-nutos, as células se depositam no fundo e sobre elas observamos uma cama-da de líquido amarelo palha ou âmbar, claro, opaco e viscoso, o plasma san-güíneo. Em um indivíduo normal, o plasma corresponde a 60% do volume desangue, para um hematócrito de 40%, porém, quando recolhemos um volumede sangue em um tubo de vidro, após alguns minutos forma-se um coágulo.Em seguida, o coágulo se consolida, torna-se mais firme e sólido por um me-canismo conhecido como retração. Ao se retrair, o coágulo expele a maior par-te de líquido retido no seu interior e o líquido expelido é denominado soro san-güíneo. O soro corresponde ao plasma sem as proteínas do sistema de coa-gulação e outras retidas no coágulo.

Fig. 5.1 — Um modo de se confeccionar uma distensão sangüínea.

Gotícula de sangue

Lâmina distensora




A água, sob a forma líquida, é o principal componente do plasma sangüí-neo e corresponde a 91% do seu volume. Os 9% restantes correspondem a

proteínas (7%) e outros elementos dissolvidos (2%).O plasma permite o livre intercâmbio de vários componentes entre o san-

gue e o líquido intersticial. Este intercâmbio é realizado através dos poros damembrana da célula endotelial que constitui o capilar. Em condições habitu-ais, devido às dimensões de sua molécula, as proteínas plasmáticas não atra-vessam a membrana do capilar, permanecendo no plasma. Entretanto, outrassubstâncias dissolvidas no sangue e as moléculas de água podem se difun-dir livremente. A saída da água do plasma através dos capilares é controladapela pressão coloidosmótica (pressão oncótica) e pelo estado da permeabi-lidade das membranas. Em outras palavras, as proteínas extraem água dostecidos para os capilares e dificultam a saída de água dos capilares para ostecidos.

As proteínas do plasma são de três tipos principais: a albumina, as globu-linas e o fibrinogênio.

Fig. 5.2 — Tubos de hematócrito com sangue. À esquerda, antes da centrifugação, e à direita, após centrifugação.

Tabela 5.1

Hematócrito Normal Apresentando a Porcentagem dos Elementos Figurados

Homem: 40% a 54%

Mulher: 35% a 47%Criança: 36% a 44%

Recém-nascido: 44% a 62%

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

Plasma

Leucócitos

Eritrócitos




A albumina corresponde a 55% do total de proteínas plasmáticas, sendo oprincipal responsável pela manutenção da pressão coloidosmótica do plasma.

As globulinas correspondem a 38% do total de proteínas e são de três ti-pos principais: alfaglobulinas, betaglobulinas e gamaglobulinas. As globuli-nas alfa e beta desempenham diversas funções auxiliando no transporte de

outras substâncias pelo organismo, sendo chamadas de carreadoras outransportadoras. Elas se combinam com substâncias, formando complexosconjugados que são transportados a diversos órgãos para exercer suas fun-ções. As gamaglobulinas e algumas betaglobulinas são parte fundamental dosistema de defesa do organismo, incluindo-se os mecanismos de imunidadee alergia. Essas globulinas formam os anticorpos, protegendo o organismocontra infecções.

O fibrinogênio, outras proteínas e alguns fosfolipídeos constituem a por-ção plasmática responsável pelo fenômeno da coagulação do sangue. O fibri-nogênio corresponde a 7% do total de proteínas do plasma, existindo entre 100e 700mg de fibrinogênio em cada 100mL de plasma. O fibrinogênio é sinteti-zado no fígado e, devido ao seu grande peso molecular, não costuma passarpara o líquido intersticial. Contudo, quando a permeabilidade dos capilaresaumenta, o fibrinogênio pode passar ao interstício em quantidades suficien-tes para permitir coagulação.

No plasma também encontramos outras substâncias dissolvidas, como oseletrólitos. Os principais eletrólitos no plasma são o potássio, sódio, cloro,cálcio, fosfato, sulfato e magnésio. Estes eletrólitos são necessários ao desen-volvimento da função celular, difundindo-se para o líquido intersticial e depois

para o líquido intracelular. O cálcio, sódio e potássio são essenciais à condu-ção dos impulsos elétricos e à contração muscular.Além dos eletrólitos, diversas outras substâncias são transportadas pelo

plasma sangüíneo e alcançam o líquido intracelular e são fundamentais namanutenção das funções celulares como a glicose, hormônios, colesterol, uréia,creatinina, aminoácidos, hidratos de carbono, ácidos graxos, vitaminas e ou-tras. A glicose é uma fonte essencial de energia para todos os tecidos do or-ganismo e sua concentração normal é de 80 a 120mg%. A glicose que se en-contra dissolvida na água do plasma é utilizada como fonte de energia e, jun-to com outros açúcares, penetra nas células por difusão, o que é favorecido

pela insulina, um hormônio produzido pelo pâncreas.

ELEMENTOS F IGURADOS

São representados pelos eritrócitos, leucócitos e plaquetas (Fig. 5.3). Oselementos figurados apresentam diferentes dimensões e ocorrem em diferen-tes proporções no sangue.

Eritrócitos

Os eritrócitos ou hemácias são os glóbulos vermelhos do sangue. Nasdistensões sangüíneas de sangue periférico apresenta-se como um disco deformato bicôncavo de 1,8µm de espessura, variando de 7,5 a 8,7µm, e suas di-




mensões diminuem levemente com a idade. São estruturas anucleadas que sedeformam com facilidade. A sobrevida média das hemácias no sangue circu-lante é de 100 a 120 dias; ao final desse período as suas membranas tornam-se frágeis e as hemácias mais velhas são removidas da circulação. A destrui-ção e a produção de hemácias se equilibram, não havendo anemia oupoliglobulina. A medula óssea produz hemácias continuamente para a sua re-novação no sangue circulante. As hemácias não apresentam organelas e o seucitoplasma, constituído de material denso e granular, corresponde praticamen-

te à hemoglobina, responsável por sua acidofilia típica.A principal função das hemácias é conter a hemoglobina, pigmento encar-regado do transporte dos gases respiratórios (oxigênio e gás carbônico) paratodos os tecidos, o que é facilitado pela forma bicôncava da hemácia. A ma-nutenção da forma do eritrócito deve-se a elementos do seu citoesqueleto,onde filamentos da proteína espectrina ancoram-se à membrana celular atra-vés de três proteínas (proteína da banda 3, anquirina e proteína da banda 4).

A hemoglobina é produzida no interior dos precursores das hemácias lo-calizados na medula óssea, pela utilização do ferro captado da circulação. Oferro da circulação sangüínea é obtido da digestão dos alimentos ingeridos e

durante o processo de renovação das hemácias envelhecidas. Quando a he-moglobina está ligada ao oxigênio é denominada oxiemoglobina, conferindoao sangue a sua cor característica, e quando se une ao gás carbônico é de-nominada carboxiemoglobina apresentando tonalidade mais escura e menosbrilhante. A hemoglobina apresenta maior afinidade ao CO

2do que ao O

2e,

quando os eritrócitos passam pelos pulmões, suas hemoglobinas se ligam aoO

2(devido à sua grande concentração nos alvéolos) e, à medida que eles se

aproximam das células que estão carregadas de CO2, suas hemoglobinas libe-

ram o O2

para se ligarem ao CO2, distribuindo o oxigênio para todas as célu-

las do corpo.

A hemoglobina é formada a partir da combinação de quatro moléculas, ouradicais heme, com uma proteína, a globina. O radical heme é um complexometálico que contém ferro no estado ferroso e é o responsável pela cor do pig-

Tabela 5.2

Elementos Figurados no Sangue Periférico

Figurado Dimensões Quantidade

Eritrócitos 6,5 a 8µm 3,9-5,5 milhões/µL na mulher4,1-6,0 milhões/µL no homem

Leucócitos 6.000-10.000/µL

Neutrófilo 12-15µm 60-70%

Eosinófilo 12-15µm 2-4%

Basófilo 12-16µm 0-1%

Linfócito 6-18µm 20-30%

Monócito 12-20µm 3-8%

Plaquetas 2-4µm 200.000-400.000/µL




mento. As moléculas do oxigênio combinam-se com o ferro da hemoglobi-na mediante ligação química especial, facilmente reversível, que favorece asua liberação nos tecidos do organismo. A globina é uma proteína incolorformada por dois pares de cadeias de polipeptídeos: um par chamado de

polipeptídeo alfa e outro par, o polipeptídeo beta. Portanto, a molécula da

hemoglobina é formada pela união de quatro polipeptídeos e quatro radicaisheme. A cadeia alfa-globina (polipeptídeo alfa) é constituída por um conjun-to de 141 aminoácidos, enquanto a cadeia betaglobina (polipeptídeo beta)inclui 146 aminoácidos. Elas se reúnem duas a duas formando três tipos prin-cipais de hemoglobinas. No adulto, a hemoglobina A1 (Hb A1) é a princi-pal hemoglobina, enquanto a hemoglobina A2 (Hb A2) ocorre em menorquantidade. A hemoglobina fetal (HB F) é muito ávida pelo oxigênio e degrande importância na vida fetal, já que o feto não tem acesso ao ar. Nosadultos, 96% da hemoglobina são normalmente Hb A1, 2% de Hb A2 e 2%

de Hb F.Além da hemoglobina encontramos uma grande quantidade da enzimaanidrase carbônica, que tem a função de catalisar a ligação entre o gás carbô-nico e a água, formando o ácido carbônico. Essa molécula é altamente instá-vel, dissociando-se naturalmente em bicarbonato e hidrogênio. Desta forma,o gás carbônico, que é tóxico para a célula, é transportado também na formade bicarbonato.

A produção de hemoglobina pelos hemocitoblastos na medula óssea de-pende de uma série de fatores, inclusive da presença do ferro, obtido princi-palmente dos alimentos ingeridos. O organismo absorve o ferro ao nível do

duodeno e do jejuno, principalmente sob a forma “não-heme” (95%), sendotransportado para a medula óssea mediante combinação com a glicoproteínatransferrina. O ferro, que não é imediatamente usado para a produção da he-moglobina, fica armazenado no tecido hemopoiético sob a forma de ferritina.

O 2,3-difosfoglicerato (2,3-DPG) é um composto químico encontrado nointerior da hemácia. O 2,3-DPG ocorre no sangue em quantidades idênticas àsda hemoglobina e se encontra combinado com a hemoglobina. A principal fun-ção do 2,3-DPG é reduzir a afinidade da hemoglobina pelo oxigênio, facilitan-do a sua liberação nos tecidos.

LeucócitosOs leucócitos ou glóbulos brancos do sangue encontram-se engajados

com a defesa do organismo. A denominação glóbulos brancos deve-se à ob-servação macroscópica do sangue após sua coagulação em um tubo de en-saio, devido a uma camada branca observada acima dos eritrócitos (Fig. 5.2).

A vida média dos leucócitos circulantes é de seis a oito horas; permane-cendo nos tecidos cerca de dois a três dias. São células nucleadas, podendoser divididos em dois grandes grupos:

• Granulócitos, também chamados de polimorfonucleares,apresentam nú-

cleo com vários lóbulos e contêm grânulos específicos no citoplasma;• Agranulócitos ou mononucleares, são células que não apresentam

grânulos específicos citoplasmáticos.




Granulócitos

Os granulócitos apresentam núcleo com formato irregular e, de acordo coma afinidade tintorial de seus grânulos citoplasmático, podem ser classificadosde três tipos: os neutrófilos, os eosinófilos e os basófilos.

Neutrófilos

Os neutrófilos são os leucócitos mais numerosos; possuem forma arredon-dada, com um núcleo que apresenta de três a cinco lóbulos unidos por pon-tes de cromatina (Fig. 5.3). Quando jovem, o núcleo não é lobulado e alobulação nuclear aumenta à medida que a célula envelhece. Em pessoas dosexo feminino nota-se freqüentemente um apêndice nuclear em forma de raque-te (corpúsculo de Barr) que contém a cromatina sexual constituída por um cro-mossoma X heterocromático (Fig. 5.4).

Os neutrófilos são dotados de capacidade fagocitária e possuem numero-sos grânulos no seu citoplasma. Os primeiros grânulos produzidos são os grâ-

nulos primários ou azurófilos; depois se inicia a síntese dos grânulos espe-cíficos ou secundários. Os grânulos azurófilos são lisossomos que contêmperoxidases e enzimas hidrolíticas, atuando na degradação dos componentesfagocitados. Os grânulos secundários são menores e mais numerosos que osprimeiros, contêm fosfatase alcalina, lactoferrina (uma proteína ávida por fer-ro), lisozima (ataca os peptidoglicanos da parede das bactérias Gram-positivas)e outras substâncias de ação bactericida capazes de formar poros na membra-

na das bactérias causando sua morte; e um agente bacteriostático que impe-de a proliferação de bactérias. Um terceiro grânulo, o grânulo terciário, pos-sui a enzima colagenase, responsável pela degradação da matriz do tecido conjuntivo permitindo o deslocamento do neutrófilo para o local de inflamação.

Na circulação sangüínea, os neutrófilos podem estar suspensos no plas-ma e circulando nos vasos sangüíneos (compartimento circulante) ou liga-dos ao endotélio, não sendo levados pela corrente sangüínea (compartimen-to marginal).

Eosinófilos

Os eosinófilos são células com 12-17µm de diâmetro; possuem um núcleobilobulado, sendo facilmente reconhecidos nas distensões sangüíneas pelapresença de grânulos fortemente acidófilos (Fig. 5.3). São células dotadas dacapacidade fagocitária com afinidade pelo complexo antígeno-anticorpo, masa atividade microbicida é menor que dos neutrófilos.

Os grânulos dos eosinófilos são ovóides (0,15-1,5µm de comprimento e 0,3-1,0µm de espessura) e contêm um cristalóide central eletrondenso circunda-do por uma matriz eletronluscente. No homem, o cristalóide consiste em umaproteína básica principal, enzimas hidrolíticas e peroxidase. Grânulos meno-

res (0,15-1,5µm) contêm fosfatase ácida e aril sulfatase. Há evidências de queos eosinófilos produzem substâncias que inativam leucotrienos e histamina.A aril sulfatase neutraliza a ação da substância de reação lenta (SRL), e a




histaminase atua sobre a histamina. Desta forma, os grânulos dos eosinófilos,quando liberados, impedem a vasodilatação diminuindo a reação inflamatória.

Basófilos

Os basófilos são os leucócitos menos numerosos; possuem um núcleobilobulado, normalmente de difícil visualização devido à grande quantidade degrânulos citoplasmáticos (Fig. 5.3).

Fig. 5.3 — Elementos figurados do sangue periférico.

Neutrófilo Eosinófilo

Basófilo Linfócito

Monócito Eritrócito




Os grânulos possuem enzimas hidrolíticas, heparina, histamina e a subs-tância de reação lenta (SRL). A histamina e a SRL são agentes vasodilatado-

res que permitem a saída de leucócitos do sangue para o tecido conjuntivodurante a reação inflamatória. A heparina é um anticoagulante que age local-mente e, junto com a histamina e a SRL, auxilia a saída desses leucócitos dosangue.

Na membrana dos basófilos encontramos receptores para a fração Fc daIgE produzida em resposta à presença de substâncias alérgicas. A ligação aosantígenos específicos da membrana promove degranulação da célula, liberandohistamina e outros vasoativos, tendo como resultado a reação de hipersen-sibilidade imediata (anafilática), como em algumas formas de asma, urticáriae anafilaxia.

Agranulócitos

Encontramos no sangue dois tipos agranulócitos: os monócitos e os lin-fócitos.

Monócitos

Os monócitos são os maiores leucócitos, possuindo núcleo irregular comuma pequena reentrância, citoplasma com numerosos grânulos pequenos edensos (lisossomos) (Fig. 5.3).

Os monócitos são células circulantes, utilizando o sangue como veículode transporte. Ao deixarem a medula óssea, onde são produzidos, permane-

Fig. 5.4 — Tipos de neutrófilos.

Neutróf ilo jovem Neutrófi lo de meia- idade

“raquete”

Neutrófilo maduro




cem no sangue apenas por alguns dias, atravessando a parede de vasos san-güíneos e ganhando o tecido conjuntivo, dando origem aos macrófagos. Oconjunto de células representado por precursores da medula óssea, monóci-tos circulantes e macrófagos presentes em diversos tecidos, constitui o sis-tema macrofágico-monocitário (sistema mononuclear fagocitário, SMF).

Linfócitos

Os linfócitos são as principais células do sistema imune. Possuem nú-cleos esféricos, ligeiramente endentados, que ocupam quase todo o cito-plasma da célula (Fig. 5.3). Nesse citoplasma encontramos principalmentepolirribossomas livres e poucas mitocôndrias. Eventualmente, podem seridentificados lisossomas pequenos e densos que correspondem aos grâ-nulos azurófilos.

Existem dois tipos funcionais de leucócitos: os linfócitos T e os linfócitos

B. Os linfócitos B são assim denominados porque foram descritos pela primeiravez na bolsa de Fabrício das aves. Ambos podem ser produzidos nos tecidoslinfóides e na medula óssea. Os linfócitos B têm um tempo variável de vida e,quando diferenciados em plasmócitos, participam na produção de anticorpos.Os linfócitos T são assim denominados porque completam a sua maturaçãono timo. São de vida longa e participam ativamente dos mecanismos relacio-nados com a imunidade celular. Receptores existentes na sua superfície sãocapazes de identificar antígenos específicos. Ao reconhecer um antígeno, oslinfócitos T estimulam a diferenciação dos linfócitos B visando à produção deanticorpos específicos para aquele antígeno.

Plaquetas

As plaquetas, também chamadas trombócitos, não são células, mas simcorpúsculos ou fragmentos celulares, formados a partir de uma célula gigan-te chamada megacariócito residente na medula óssea. A fragmentação do ci-toplasma de megacariócitos resulta na formação das plaquetas, que sãolançadas na circulação sangüínea sob a forma de corpúsculos ligeiramente ar-redondados (Fig. 5.5).

As plaquetas não contêm grânulos no seu interior e seu diâmetro médioé de 1,5 a 4µm, com espessura de 0,5 a 1µm. Quando ativadas, as plaquetasintumescem substancialmente e podem atingir diâmetros entre 25 e 50µm.

A estrutura interna das plaquetas é bastante complexa e adaptada às fun-ções que exercem. Envolvendo as plaquetas existe uma camada mais exter-na chamada glicocálice, rica em glicoproteínas. Esta camada contém recep-tores para diversos agentes capazes de ativar as plaquetas. Algumas destaglicoproteínas são importantes para as funções de adesividade e agregaçãoplaquetária. Abaixo da camada glicoprotéica existe a membrana plaquetária.Internamente existe um conjunto de filamentos especializados, próximos de

um sistema canalicular, com diversos canalículos que penetram no interiordas plaquetas, chamado sistema canalicular aberto. O sistema canalicularaberto aumenta bastante a superfície da plaqueta e permite a expulsão de




produtos secretados por suas organelas para o plasma, permitindo ainda afácil penetração de substâncias do plasma para o interior das plaquetas.

O citoplasma das plaquetas é de consistência viscosa, contendo numero-sas organelas e grânulos. Microfilamentos e túbulos densos, que contêm ac-tina e miosina, contribuem para manter a forma discóide, além de participar na

contração das plaquetas quando estimuladas pelo aumento do cálcio no seuinterior. A contração das plaquetas é o resultado da movimentação dosmicrofilamentos, comprimindo as organelas e grânulos citoplasmáticos, libe-rando seu conteúdo para o plasma através do sistema canalicular aberto. Esteprocesso representa um sofisticado mecanismo de liberação de substânciasproduzidas pelas plaquetas. As organelas e os grânulos no interior do cito-plasma são de vários tipos; as principais são as mitocôndrias, os grânulosdensos e os grânulos alfa. Os grânulos alfa contêm o fator plaquetário IV, queparticipa dos fenômenos da coagulação do sangue e contém ainda beta-tromboglobulina e fibrinogênio. Os grânulos densos são reservas de difosfato

de adenosina (ADP), trifosfato de adenosina (ATP), cálcio e serotonina. Ou-tros grânulos do citoplasma contêm ainda catalase, fosfatase ácida e outrasenzimas. O sistema tubular denso contém ciclooxigenase, enzima que converteo ácido araquidônico da membrana em prostaglandinas e em tromboxano A2,que é a substância vasoconstritora mais potente do organismo, cujo meta-bólito é o tromboxano B2. A mitocôndria é a organela responsável pela pro-dução e pelo armazenamento de energia da plaqueta, onde o ATP (trifosfatode adenosina) é produzido e armazenado. Outros grânulos do citoplasma con-têm diversas enzimas, como a fosfatase ácida e a glicuronidase.

As plaquetas são fundamentais aos processos de interrupção da perdasangüínea (hemostasia), na formação e na retração do coágulo. Sua atuaçãodepende das propriedades de adesão e agregação.

Os autores fornecem várias explicações sobre o mecanismo de agregação,adesão plaquetária e a coagulação sangüínea. A superfície externa das plaque-tas tem cargas elétricas negativas, iguais às do endotélio dos vasos. As car-gas elétricas iguais tendem a se repelir; por esta razão, as plaquetas tendem apermanecer intacta na circulação, sem aderirem ao endotélio. Quando esseequilíbrio elétrico se rompe, por lesão do endotélio ou por contato com qual-

Fig. 5.5 — Megacariócito e a formação de plaquetas.

MegacariócitoPlaquetas




quer superfície diferente do endotélio vascular, as plaquetas imediatamenteaderem à superfície com que entram em contato. Esta é a propriedade deadesividade.

No estado normal. o endotélio intacto também produz certas substânciasque inibem a agregação plaquetária, como a prostaciclina e o óxido nítrico

(NO2). O endotélio também bloqueia a coagulação pela presença de trom-bomodulina e uma substância semelhante à heparina presente na membranadas células endoteliais, que inativam fatores específicos da coagulação.

Quando um vaso sangüíneo é seccionado, ou sua superfície endotelial élesada ou alterada, as plaquetas aderem ao ponto danificado. Ao contato comsuperfícies não-endoteliais as plaquetas intumescem, criam diversos prolon-gamentos na sua superfície e aderem entre si, atraindo novas plaquetas pró-ximas para aderir ao grupo inicial, além de aprisionar hemácias e leucócitos,formando-se o chamado grumo plaquetário, que originarão o futuro coágulo.Esta é a propriedade de agregação. Existem diversas substâncias que estimu-

lam a agregação das plaquetas, como: ADP (difosfato de adenosina), adrena-lina, vasopressina, serotonina, ácido araquidônico, tromboxano A2. Algumasdessas substâncias são liberadas pelas próprias plaquetas, para favorecer aagregação das demais. A ativação das plaquetas também pode ocorrer em res-posta a estímulos físicos. Uma vez ativadas, a seqüência de fenômenos(adesividade, aglutinação e formação de grumos) é a mesma, qualquer que sejaa natureza do estímulo inicial.

O processo de coagulação se inicia com a lesão das células endoteliais, queleva à liberação de substâncias (fator de Von Willebrand e tromboplastina tis-

sular) e a interrupção da produção de inibidores da coagulação e da agrega-ção plaquetária. A célula endotelial também produz a endotelina, um potentevasoconstritor que, ao reduzir o calibre do vaso, impede a perda de sangue.As plaquetas aderem ao colágeno subendotelial e, na presença do fator deWillebrand, liberam o conteúdo de seus grânulos, aderindo-se umas às outras.Ao conjunto destes eventos denomina-se ativação plaquetária. A liberação deADP e tromboplastina estimula a aderência de plaquetas circulantes às plaque-tas associadas ao colágeno e à degranulação. O ácido araquidônico, que é for-mado na membrana da plaqueta ativada, é convertido a tromboxano A

2. As

plaquetas agregadas formam um pequeno trombo que impede a saída de san-

gue do vaso. Tanto a tromboplastina tissular, produzida pelo endotélio, quantoa tromboplastina plaquetária agem sobre a protrombina circulante, converten-do-a em trombina. Na presença de Ca2+, a trombina converte o fibrinogênio emfibrina. Na malha de fibrina, os elementos figurados do sangue ficam retidose este conjunto de elementos forma o coágulo (trombo) (Fig. 5.6).

A serotonina liberada também pelas plaquetas estimula a adesividade e aagregação, além de produzir vasodilatação local. A vasodilatação acentua adifusão das plaquetas para as regiões onde formarão os grumos. Através dosfatores III e IV liberados do seu interior, as plaquetas participam das modifi-cações das proteínas da cascata da coagulação, para a formação do coáguloe, posteriormente, para a sua retração com expulsão do soro do seu interior.

A ação de outros estímulos desencadeia um processo de alteração doestado de diversas proteínas do plasma sangüíneo, que resulta na trans-




formação do fibrinogênio em fibrina. Este fenômeno da coagulação do

sangue ou formação do coágulo sangüíneo é o papel fundamental dasplaquetas.Existe um grande interesse no estudo de substâncias capazes de inibir

temporariamente, e por curto prazo, a atividade das plaquetas, com o objeti-vo de impedir a ativação, adesão e agregação. A aspirina e o dipiridamol sãosubstâncias que têm um efeito inibidor da agregação plaquetária no ser hu-mano. Uma substância que tem sido experimentada recentemente com essa fi-nalidade é a aprotinina. Diversos estudos têm demonstrado inibição tempo-rária e curta da adesividade plaquetária pela aprotinina, preservando um nú-mero maior de plaquetas, principalmente durante certos procedimentos de ci-

rurgia cardíaca com circulação extracorpórea. Contudo, essa substância pro-duz efeitos colaterais importantes, como hipotensão arterial, além de ser des-truída muito rapidamente no sangue.

TEMPO DE VIDA DOS ELEMENTOS SANGÜÍNEOS

As hemácias vivem em média 120 dias, sendo posteriormente fagocitadaspelos macrófagos presentes no baço e no fígado ou na própria medula óssea.Os granulócitos vivem cerca de dois a três dias e, após exercerem suas fun-ções no compartimento extravascular, são fagocitados por macrófagos

teciduais. Os linfócitos B vivem cerca de três a quatro meses, enquanto oslinfócitos T podem durar cerca de 20 a 30 anos. As plaquetas têm umasobrevida média de dez dias.

Fig. 5.6 — Seqüência de eventos associados à coagulação sangüínea.

ADP

Célulaendotelial

Aderência aocolágeno

subendotelial

Liberação deendotelina (vasoconstritor)

Lesão

Liberação detrombosplatina

tissular pelo endotélio

Protrombinacirculante

Trombina

Fibrinogênio Fibrina+elementosfigurados

Coágulo

Agregaçãoplaquetária

Tromboplastinaplaquetária

Tromboxano A2(vasoconstritor)Ácidoaraquidônico

(membrana)

Plaquetaativada

Ativaçãoplaquetária




HEMATOPOIESE

Hemopoiese, hematopoese ou hematopoiese são termos utilizados paradenotar a formação (gênese, poiese) dos elementos figurados do sangue(hemo), isto é, células (leucócitos) e corpúsculos sangüíneos (hemácias e pla-

quetas). A maioria das células sangüíneas tem vida relativamente curta e é in-capaz de realizar a divisão celular; por esta razão precisam ser constantemen-te produzidas.

A hematopoiese se inicia no embrião por volta do segundo mês, prolon-gando-se por toda a vida do indivíduo. Durante o desenvolvimento intra-uterino (fase intra-uterínica da hematopoiese), no mesênquima da parede dosaco vitelino, inicia a produção das células sangüíneas e, à medida que os ór-gãos vão se definindo estruturalmente, a hematopoiese passa a ocorre no fí-gado, no baço, no timo e, por último, na medula óssea.

O tecido hematopoiético, derivado do mesênquima, é dividido em tecidomielóide, que constitui a medula óssea vermelha e em tecido linfóide, encon-trado nos nódulos linfóides, linfonodos, tonsilas, baço e timo.

O tecido mielóide é responsável pela produção da maioria dos elementosfigurados do sangue, produção e destruição de hemácias (hemocaterese) earmazenamento de ferro.

O tecido linfóide é responsável pela proliferação de linfócitos B e T. Os lin-fócitos B são produzidos na medula óssea e migram para os órgãos linfóidesperiféricos, onde proliferam sob estímulo antigênico. Linfócitos ainda não-di-ferenciados, ao penetrarem no timo, se diferenciam em linfócitos T e, como os

linfócitos B, ocuparão sítios específicos nos órgãos linfóides.Assim, a hematopoiese compreende uma seqüência de eventos em várioscompartimentos e subcompartimentos com estágios definidos na maturaçãodos elementos figurados do sangue. Nos compartimentos mitóticos notam-se células jovens em ativa mitose; enquanto nos compartimentos pós-mitóticos (ou de distribuição) as células maduras não sofrem mais divisão ce-lular. O tempo de geração para um determinado tipo celular é igual em suces-sivos compartimentos, havendo uma correlação entre o compartimento de pro-dução e o compartimento de distribuição; ou seja, a circulação sangüínea re-flete a produção medular.

Fases da Hematopoiese

Considerando as fases de formação de células sangüíneas, a hematopoiesepode ser dividida em fase pré-natal e fase pós-natal. Ambas as fases podemocorre em órgãos linfóides, no fígado (hematopoiese extramedular) e na me-dula óssea vermelha (hematopoiese medular).

Fase Extramedular da Hematopoiese

Durante a terceira semana da vida embrionária ocorre a formação dos va-sos sangüíneos (angiogênese). Os angioblastos (células formadoras de vasosderivadas das células mesenquimais) se agregam formando grupos de células




— as ilhotas sangüíneas no mesênquima intra-embrionário do saco vitelino(fase mesoblástica ou pré-hepática ou primordial). No interior destas ilhotas,formam-se pequenos espaços que confluem para formar pequenas cavidades.Os angioblastos voltados para a cavidade se achatam e originam as célulasendoteliais. As cavidades com revestimento de células endoteliais se fundem,

formando os primórdios dos vasos sangüíneos. Ao final da terceira semana,a partir das células endoteliais, formam-se as primeiras células sangüíneas(hemocitoblastos), consideradas as primeiras células-fonte hemopoiética (stem

cells, no inglês). No final do primeiro mês, o embrião possui um sistema vas-cular e um coração rudimentar; mas, neste período o sangue ainda não con-tém nem leucócitos nem plaquetas. Na fase mesoblástica da hematopoiese,quase todas as células formadas são eritrócitos nucleados.

Durante o segundo mês de vida, algumas células migram para o fígado, quepassa a ser o principal local de formação eritropoiética fetal (fase hepática dahematopoiese: do segundo ao sexto mês). No segundo mês também surgem osleucócitos granulócitos e os megacariócitos ao longo dos sinusóides do fígado.

A partir do terceiro mês, além do fígado, os linfonodos, o timo e o baçopassam a contribuir na formação de células do sangue (fase hepato-esplêni-ca-tímica da hematopoiese).

Por volta da quarta e quinta semana, com o aparecimento dos centros deossificação na cartilagem dos ossos longos, se inicia a fase medular-linfóide

(ou definitiva), que se sobrepõe à fase anteriormente citada. A clavícula é oprimeiro osso a revelar atividade hemopoiética e sua medula inicia sua ativi-dade entre o segundo e o terceiro mês de vida fetal; mas no quarto mês de vida

intra-uterina esta atividade torna-se bastante significativa. A hematopoiese nofígado e baço diminui à medida que na medula óssea se estabelece e elaboraa maior parte das células do sangue.

Em vertebrados não-mamíferos, outros órgãos apresentam tecido hemato-poiético, como o baço, a bursa de Fabricius das aves (um divertículo que seestende dorsalmente a partir da cloaca e que produz linfócitos B), o tifilosolodas lampreias (um dobramento do mesentério na porção ventral do tubo di-gestivo), as gônadas em elasmobrânquios e peixes pulmonados (onde ocorrea granulopoiese), o fígado de teleósteos, de anfíbios e de répteis (granulopoie-se) e os rins de alguns peixes teleósteos (hemopoiese).

Fase Medular da Hematopoiese

Em torno do quinto mês do período fetal, com o início da formação dosossos, os espaços medulares tornam-se importantes fontes de elementos san-güíneos e a medula óssea fetal inicia a produção dos leucócitos (granulopoie-se) e das plaquetas (megacariopoiese); enquanto a produção de eritrócitospela medula óssea se inicia por volta do sétimo mês. Assim, a fase medularse inicia no sexto mês e propaga-se até a idade adulta. Na puberdade, os prin-cipais ossos a apresentar medula hematogênica (medula vermelha) são os os-

sos da base do crânio, o esterno, as vértebras, os ilíacos, as costelas, as ca-beças do úmero e do fêmur. Contudo, 50% dos espaços são ocupados pormedula amarela, isto é, não-hematogênica.




A medula óssea pode ser considerada um órgão constituído por diferen-tes tecidos, estando dividida em compartimentos: compartimento vascular(representada pelas artérias, veias e capilares sinusóides) e compartimento he-

matopoiético (com estroma de tecido reticular e células livres, além de célulasadiposas).

Distinguem-se dois tipos de medula: a medula óssea amarela, constituí-da principalmente por tecido adiposo; e a medula óssea vermelha ativa nahematopoiese.

A medula óssea vermelha é formada por material com consistência seme-lhante a uma geléia e está localizada entre as trabéculas ósseas do osso es-ponjoso e sustentada por rede de fibras e células reticulares, sendo suprida poruma artéria nutridora principal e arteríolas terminais. O sangue chega à medulaatravés de capilares sinusóides dirigindo-se a um sinusóide central que contémuma lâmina basal permeável e células reticulares adventiciais, cujos prolonga-mentos formam uma malha sobre a qual repousam as células sangüíneas.

Na organização tecidual da medula observa-se que células da linhagemeritrocítica (ilhotas eritroblásticas) ocupam os espaços centrais da medula,estando circundadas por um histiócito central — a célula auxiliar , quefagocita o material nuclear extrusado pelos normoblastos em maturação,reciclando o ferro necessário à estabilização da hemoglobina. As células daslinhagens leucocíticas (granulocítica, monocítica, linfocítica) têm uma distri-buição mais difusa; sua produção se inicia nas proximidades do limite entre oosso recém-formado e o tecido medular (junção osteóide-medula). A linhagem

megacariocítica se desenvolve junto aos sinusóides, liberando as plaquetas

diretamente no interior da corrente sangüínea.O primeiro grupo de animais a apresentar tecido mielóide envolvido coma produção de células leucocíticas foi os anuros (sapos, rãs e pererecas). De-pois nos amniotas, o tecido mielóide está envolvido com a granulopoiese e aeritropoiese.

No adulto, se algum estresse afetar o componente medular, a hematopoieseextramedular poderá funcionar como um mecanismo compensatório.

Teorias da Hematopoiese

Existem três teorias. A Teoria Monofilética é a mais aceita, e admite que oprecursor mais jovem capaz de se diferenciar em qualquer tipo de elemento fi-gurado do sangue é uma célula-fonte comum única — o hemocitoblasto.

A Teoria Difilética (ou Polifilética Dualista) admite a existência de doistipos de células precursoras: um leucócito primitivo capaz de produzir granu-lócitos (linfócitos e monócitos); e uma célula endotelial que reveste sinusói-des colapsado, capaz de produzir eritrócitos e megacariócitos.

A Teoria Polifilética ou Polifilética Completa reconhece uma célula-fonte

capaz de auto-replicação e/ou diferenciação, mas sendo diferente para cadatipo de elemento figurado.

Com base na Teoria Monofilética, as ilhotas de células sangüíneas em for-mação (CFU= Unidades Formadoras de Colônias) e em diferenciação podemser agrupadas em categorias gerais:




Célula-fonte (Stem cell) Pluripotencial ou Totipotencial

A célula-fonte (hemocitoblasto), localizada na medula óssea, tem a capa-cidade de se diferenciar em qualquer tipo de elemento figurado do sangue. Emhumanos adultos, a primeira célula-fonte reportada foi a hematopoiética (HSC

= célula fonte hematopoiética). Esta célula lembra linfócitos grandes, possu-indo núcleo indiferenciado com cromatina densa e citoplasma basófilo devi-do à presença de muitos ribossomas. É de vida longa, capaz de auto-renova-ção ilimitada ou prolongada, de extensiva proliferação por divisão mitótica,originando células-fonte semelhantes (PHSC = célula-fonte hemopoiéticapluripotentes) que garantirão a sua própria manutenção; e células multipoten-ciais (MHSC = células-fonte hemopoiéticas multipotentes), fonte de elemen-tos figurados do sangue.

Há duas populações de células hematopoéticas multipotentes (MHSC):

células que constituem a unidade formadora de colônia no baço (CFU-S) e cé-lulas que constituem a unidade formadora de colônia linfóide (CFU-L). As cé-lulas CFU-S são precursoras das células mielóides (eritrócito, granulócitos,monócitos e plaquetas), enquanto as células CFU-L são precursoras das cé-

lulas linfóides (células T e células B) (Fig. 5.7).

Células Progenitoras Restritas

O destino de vários progenitores celulares é restrito e as células nãosão auto-renováveis, formando-se células progenitoras da linhagem

mielóide (CFU-HC) e células progenitoras da linhagem linfóide (CFU-L);depois surgem as células progenitoras uni ou bipotentes e, finalmente, ascélulas precursoras específicas, as primeiras células a apresentar morfo-logia distinta para cada célula sangüínea (eritroblasto, megacarioblasto,monoblasto, pró-mielócito). A proliferação e a diferenciação de células pro-genitoras restritas estão sob controle de fatores reguladores específicospara cada linhagem celular.

Fig. 5.7 — Diferenciação dos elementos do sangue a partir de células-fonte.

Célula-fonte multipotentes(auto-renováveis)

CFU-S(precursores dascéulas mielóides)

CFU-L(precursores dascéulas linfóides)

Célulasprogenitorasemdiferenciação

ElementosfuncionaisEritrócito Granulócito Monócito Plaqueta Linfócito T Linfócito B




ELEMENTOS F IGURADOS

Nos mamíferos, os elementos figurados encontrados no sangue incluemcélulas maduras, representadas pelos granulócitos (neutrófilos, eosinófilose basófilos) e pelos agranulócitos (monócitos e linfócitos), incluindo os

corpúsculos (hemácias e plaquetas). Nos vertebrados não-mamíferos, os cor-púsculos são verdadeiras células possuidoras de núcleo, sendo nomeadostrombócitos.

Citocinas Hematopoiéticas

Citocinas são fatores solúveis de pequeno peso molecular, liberadas porcélulas, que atuam na comunicação celular, além de influenciarem a função deoutras células através de receptores específicos de superfície, cuja produçãoé regulada e não constitutiva. Cada citocina produz vários efeitos em diferentescélulas, sendo esta propriedade denominada pleiotropia. As citocinas podemagir em conjunto para alcançar um efeito maior do que a soma de suas açõesindividuais, sendo esta propriedade conhecida como sinergismo.

As citocinas também podem apresentar um efeito autócrino, parácrino oumesmo endócrino, podendo induzir a liberação de outras citocinas.

Após a ligação da citocina ao seu receptor da superfície da célula, o conjunto é internalizado. A internalização do complexo receptor-citocina atuacomo um mecanismo de feedback . Há uma rede multigênica de citocinas in-cluindo reguladores positivos (CSF = factor estimulador de colônia), interleu-

cinas (IL) e reguladores negativos (TGF = fator de crescimento tumoral).Citocinas hemopoiéticas ou linfopoiéticas foram identificadas quimicamen-te e seus genes clonados e seqüenciados. A maioria das citocinas é produzi-da por células do estroma medular, como células endoteliais, fibroblastos, ma-crófagos, linfócitos T ativados e pelo mesângio extraglomerular peritubular(eritropoetina).

Linhagens Hematopoiéticas

Eritropoiese

Corresponde à formação das hemácias ou eritrócitos do sangue, que, nohomem adulto, ocorre exclusivamente na medula óssea. Durante este proces-so verifica-se redução do tamanho das células, redução da basofilia (devi-do à diminuição de ribossomas livres) e aumento da acidofilia citoplasmáti-ca (em face da síntese de hemoglobina), condensação da cromatina e even-tual perda de material nuclear e organelas, além da perda da capacidade deproliferação.

As células-fonte pluripotenciais precursoras dos eritrócitos apresentamdois tipos de células progenitoras unipotenciais: BFU-E ( Burst- Forming U nits

= unidade de explosão de formação de eritrócitos) e CFU-E (C ell FormingU nits = unidades formadoras de colônias para eritrócitos), que necessitam dapresença de fatores de crescimento para a sua proliferação e diferenciação.




Os progenitores finais e os precursores celulares das hemácias são esti-mulados pelo hormônio eritropoetina. A eritropoetina é uma glicoproteína pro-duzida e liberada por células encontradas nos rins, que estimula a remoção dehemácias envelhecidas e diferenciação dos precursores em hemácias.

A diferenciação e maturação da linhagem eritrocítica necessita cerca de seis

dias, mas sob estresse a medula pode reduzir esse tempo para dois a três dias.

Estágios da Eritropoiese

Ao longo do processo de diferenciação, as células progenitoras de eritró-citos passam por modificações morfológicas que caracterizam diferentes tiposcelulares (Fig. 5.8).

Proeritroblasto: é uma célula grande (14-20µm de diâmetro) com núcleoesférico e volumoso, apresentando cromatina frouxa e uniformemente distri-buída, que contém dois ou mais nucléolo proeminentes. A evidente basofilia

citoplasmática é devido à riqueza de ribossomas livres.Eritroblasto basófilo: é uma célula um pouco menor (10-18µm de diâmetro)com núcleo esférico, relativamente pequeno com cromatina densa, porém onucléolo não é evidente. A basofilia citoplasmática ainda é observada; ape-sar de já se iniciar a síntese de hemoglobina.

Eritroblasto policromatófilo: é uma célula com 8-15µm de diâmetro, pos-suindo um núcleo esférico com cromatina mais densa que ocupa cerca de 50-60% da área celular. No citoplasma observam-se áreas basófilas (devido aosribossomas) e áreas acidófilas (hemoglobina).

Nestes três primeiros estágios, as células são capazes de proliferação, en-

quanto nos próximos estágios as células apenas se diferenciam.Eritroblasto ortocromático, eritroblasto acidófilo ou normoblasto: é umacélula com 8-12µm de diâmetro; o núcleo é pequeno com heterocromatina em

Fig. 5.8 — Estágios da eritropoiese.

Maturação de Precursores Eritrocíticos

Proeritroblasto

Eritroblasto basófilo

Eritroblasto policromatófilo

Eritroblasto ortocromático

Reticulócito

Eritrócito

Medula óssea

Sangue periférico




flocos grosseiros, sendo intensamente corado. Nota-se acentuada acidofiliacitoplasmática com traços de basofilia. Neste estágio verifica-se o processode extrusão nuclear.

Reticulócito (eritrócito policromatófilo): é um corpúsculo com 8-9µm dediâmetro, anucleado, que permanece na medula óssea cerca de três dias até a

sua maturação, e a sua sobrevida na circulação é cerca de um dia. Verifica-seacidofilia citoplasmática, além de alguma basofilia remanescente devido à pre-sença de ribossomos residuais.

Hemácia (eritrócito maduro): Nos humanos, como na maioria dos mamí-feros, são corpúsculos bicôncavos de 7,3-8µm de diâmetro, de citoplasma in-tensamente acidófilo apresentando uma área central pálida. Em vertebradosnão-mamíferos são nucleadas, de forma discóide ou elíptica, variando entre2,5µm e 80µm de diâmetro.

Granulopoiese

Refere-se à formação de células das linhagens granulocítica. Neste proces-so ocorre uma redução relativa das dimensões das células, acompanhado porum aumento da condensação e alteração da forma e lobulação do núcleo, comacúmulo de grânulos específicos e redução relativa de grânulos azurófilos, quesão destacados pelas colorações a base da mistura de Romanovsky.

Os precursores se sucedem num processo de maturação, que dura cercade 14 ou mais dias, apresentando mecanismo de feedback negativo, capaz deregular a liberação de granulócitos da medula, que pode envolver o hormônio

leucopoietina.Nos precursores há condensação nuclear e atrofia nucleolar com segmen-tação do núcleo. No citoplasma ocorre a síntese de grânulos. Os grânulos pri-mários, azurófilos ou não-específicos (com cerca de 1µm de diâmetro) contêmhidrolases ácidas semelhantes aos lisossomas; mieloperoxidase, enzima quemedeia a morte de microrganismos oxigenodependentes; defensinas, uma fa-mília de proteínas catiônicas que mediam a morte de microrganismos não-oxigenodependentes. Os grânulos secundários ou específicos (0,5µm de diâ-metro) contêm receptores de adesão, receptores quimiotáticos e receptores docomplemento. O conteúdo dos grânulos varia de acordo com o tipo celular,

podendo conter grânulos de gelatinase (uma enzima colagenolítica) e vesícu-las de secreção (com fosfatase alcalina, receptores para peptídios quimiotáti-cos, proteínas de adesão Mac-1).

Em resposta a um processo inflamatório, os grânulos de gelatinase e asvesículas secretoras se fundem à membrana, e seu conteúdo liberado, ou pelomenos exposto, ao meio externo e a enzima atua em elementos da matriz extra-celular. Durante os processos de fagocitose o conteúdo dos grânulos azuró-filos e dos grânulos específicos é exocitado.

Estágios da Granulopoise

A célula precursora passa por diferentes estágios de diferenciação(Fig. 5.9).




Mieloblasto: é uma célula esférica (15-21µm de diâmetro), núcleo esféricocom dois ou mais nucléolos, com delicada rede de cromatina que se cora notom de azul-avermelhado e ocupa a maior parte da célula; o citoplasma des-provido de grânulos cora-se em azul-pálido.

Promielócito: apresenta dimensões próximas às do mieloblasto. É uma cé-

lula esférica ou oval (18-30µm de diâmetro) com núcleo oval ou reniforme,nucléolo ainda visível e cromatina condensada; o citoplasma é mais abundantee apresenta alguns grânulos azurófilos (grânulos primários de 0,1 a 0,25µm dediâmetro);

Mielócito: é uma célula com 16-25µm de diâmetro, com núcleo oval ou acha-tado em uma face, que ocupa cerca de 50% da célula, apresentando cromatinadensa em grumos que se cora em púrpura-avermelhada; citoplasma cinza-azulado pálido encontra-se repleto por grânulos específicos (grânulos secun-dários: neutrófilos, eosinófilos ou basófilos).

Metamielócito (neutrófilo, eosinófilo e basófilo): é uma célula com 10-16µm

de diâmetro com núcleo reniforme (endentado) ou oval, cromatina grosseira,densamente compactada e nucléolo ausente; grânulos específicos predominamno citoplasma.

Formas em bastão ou bastonete (neutrófilo, eosinófilo e basófilo): são cé-lulas ligeiramente menores (10-15µm de diâmetro) com núcleo em forma de “U”,curvado ou enrolado exibindo grosseiros grumos de cromatina; o citoplasmaé preenchido por grânulos específicos.

Formas segmentadas ou granulócitos maduros (neutrófilos, eosinófilose basófilos): é a forma funcional da célula (com 8-15µm de diâmetro) com nú-cleo único que pode apresentar duas a cinco lobulações interligadas por fila-

mentos de cromatina; o citoplasma é repleto de grânulos específicos.

Fig. 5.9 — Células da linhagem granulocítica.

Maturação de Precursores Granulocíticos

Mieloblasto

Pró-mielócito

Mielócito

Metamielócito

Formas em bastão

Neutrófilo

Granulócitos maduros

BasófiloEosinófilo

Sangue periférico

Medula óssea

Fase deproliferação




Polimorfonuclear neutrófilo: o núcleo é polissegmentado, com citoplas-ma cinza-rosado devido à presença de grânulos específicos extremamente pe-quenos e de difícil individualização ao microscópio de luz.

Segmentado eosinófilo: apresenta dois a três lóbulos nucleares, com cito-plasma laranja-brilhante devido à riqueza de grandes grânulos acidófilos.

Segmentado basófilo: com dois a três lóbulos nucleares, apresenta citoplas-ma púrpura-azulado em face dos grandes grânulos basófilos.

Os neutrófilos são os granulócitos mais abundantes, localizando-se emdiversos compartimentos anatômicos e funcionais denominados compartimen-to de formação, de reserva, circulante e marginal. O compartimento medular

de formação é onde novos neutrófilos são produzidos e sofrem seu proces-so de maturação. O compartimento medular de reserva contém células madu-ras que são mantidas por intervalos de tempo variável antes de ganharem acirculação periférica. O compartimento circulante é representado pelos neu-

trófilos suspensos no sangue periférico. Há ainda o compartimento marginalrepresentado pelos neutrófilos que, apesar de se encontrarem na corrente san-güínea, não circulam, encontrando-se aderidos ao endotélio.

Monocitopoiese

Refere-se à formação de células da linhagem monocítica (Fig. 5.10). Osmonócitos são derivados de células-fonte restritas bipotenciais (CFU-NM =Unidades Formadoras de Colônias de Neutrófilos e Monócitos), do mesmo

pool dos neutrófilos. Os precursores (monoblastos, promonócitos) são esti-

mulados pelo M-CSF (Fator eStimulante de Colônias de Monócitos), não sen-do normalmente observados na medula óssea. Em condições especiais, comoem culturas de células, podem ser reconhecidos por meio dos marcadores deproliferação.

A monocitopoiese dura cerca de 55 horas e, durante este tempo, notam-se algumas alterações, como a redução de volume e a formação da endentaçãonuclear, ocorrendo ainda uma intensa formação de grânulos azurófilos (lisos-

Fig. 5.10 — Células da linhagem monocítica.

Maturação de Precursores Monócitos

Monoblasto

Pró-monócito

Monócito

Medula óssea

Sangue periférico




somas). A célula madura é capaz de proliferar quando exposta a fatores decrescimento; mas, aparentemente, esta proliferação não contribui para aumentosignificativo da população tecidual em condições fisiológicas.

Estágios da Monocitopoiese

As células passam por diversos estágios de diferenciação, apresentandodiferentes morfologias e que estão listadas abaixo.

Monoblasto: é de difícil caracterização na medula óssea e sua existênciaainda é um assunto controverso.

Promonócito: apresenta cerca de 20µm de diâmetro, núcleo com cromatinafrouxa e o citoplasma basófilo.

Monócito: é uma grande célula com 10-20µm de diâmetro, apresentandonúcleo em forma de ferradura ou de rim com cromatina uniforme, porém me-nos densa que a do linfócito, porém nenhum nucléolo é visível; citoplasmaabundante de coloração cinza-azulado pálido com numerosos e delicados grâ-nulos azurófilos, que são lisossomas.

Linfocitopoiese

É a formação de células da linhagem linfocítica. Os linfócitos originam-senos órgãos linfóides a partir de células oriundas da medula óssea (célula-tron-co multipotencial), que originam duas células progenitoras: os progenitoresCFU-TL (originam os linfócitos T: T1 e T2), CFU-TB (originam os linfócitos B)

e CFU-NK (originam as células natural killer , capazes de lisar células infec-tadas por vírus e células tumoriais).O linfoblasto é a maior célula da linhagem linfocítica, apresentando cito-

plasma basófilo sem granulações azurófilas. As citocinas IL-1 regulam linfó-citos T; e neste processo as evidências morfológicas na diferenciação não sãomarcantes, ocorrendo redução em tamanho e condensação da cromatina nu-clear. A inversão na relação núcleo-citoplasma torna o núcleo proeminente eo citoplasma como um delgado halo em torno do mesmo. Não se observa dis-tinção morfológica entre o linfócito T e o linfócito B.

A formação, a diferenciação e a maturação de linfócitos B ocorrem na me-

dula óssea, porém a diferenciação e a maturação de linfócitos T se realiza no timo;depois, as células migram para órgãos linfóides secundários como o baço, oslinfonodos, os nódulos isolados e, nas aves, para a bursa de Fabricius.

Nos mamíferos adultos, a maioria dos linfócitos é oriunda de linfócitospreexistentes no interior do tecido linfóide, os quais respondem à invasão deantígenos estranhos.

Estágios da Linfopoiese

Até se formar o linfócito maduro, sua célula precursora passa por estágiosmorfologicamente caracterizados pelos linfoblastos, prolinfócito e linfócitos.O linfoblasto é a maior célula da linhagem; o prolinfócito, menor que a ante-rior e os linfócitos, onde pode se observar dois tipos:




Linfócito não-ativado — apresenta núcleo esférico ou oval ou levementeendentado, com cromatina densa e nucléolo raramente distinto; o citoplasmaé de coloração azul-pálida e translúcido, podendo conter grânulos azurófilos(púrpura). Este tipo celular pode ser observado como um pequeno linfócito,com 7,3-10µm de diâmetro, com citoplasma muito escasso, visível apenas como

um delegado anel periférico; ou como um linfócito médio ou um linfócitogrande, com 10-14µm de diâmetro e citoplasma muito abundante;

Linfócito ativado ou reativo — é pouco freqüente em pessoas sadias, masocasionalmente pode ser observado como uma célula volumosa (10-20µm dediâmetro); o núcleo apresenta cromatina frouxa de aspecto reticulado e o ci-toplasma exibe intensa basofilia (retículo endoplasmático granular muito de-senvolvido).

Megacariocitopoiese ou Trombopoiese

Compreende a formação de células da linhagem megacariocítica outrombocítica. Os progenitores da linhagem são BFU-Mk ( Burst- Forming U nits

= unidade de explosão de formação de Megacariócitos) e CFU-Mk (C ell

Forming U nits = unidades formadoras de colônias para Megacariócitos), quesão regulados pela citocina trombopoietina. Neste processo, geralmente ocorrea maturação das células após completa amplificação (Mk-1), que é represen-tada marcadamente pela lobulação nuclear. Não há correlação entre o númerode lóbulos e a ploidia, e nem há clara distinção entre o tamanho e a matura-ção celular, uma vez que células 8N, 16N, 32N podem formar plaquetas.

Estágios da Trombopoiese

Os precursores das plaquetas seguem o seguinte estadiamento:Megacarioblasto: não é usualmente encontrado. É uma célula com 15-30µm

de diâmetro, núcleo único com delicado padrão cromatínico e diversosnucléolos; o citoplasma é basófilo de aspecto vítreo.

Mk 1, megacariócito basófilo, megacariócito linfóide ou promegacarió-

cito: representa 15% das células do pool, sendo células gigantes poliplóides(4N-64N) com 20-40µm de diâmetro capaz de sofrer múltiplas divisões mitóticas

sem divisão citoplasmática (endomitose); o núcleo é bilobulado com nucléolosvisíveis; o citoplasma é basófilo claro de difusa aparência granular devido aogrande número de ribossomas; o número de centríolos correspondente àploidia celular.

Mk 2 ou megacariócito granuloso: 65% das células do pool são célulasgigantes com 50-80µm de diâmetro, apresentando núcleo endentado de formairregular com 4 a 16 lobulações, cromatina densa periférica e nucléolos peque-nos; o citoplasma exibe granulações secundárias vermelho-vinhosa, em faceda redução do número de ribossomas. Invaginações da membrana plasmáti-ca na periferia celular podem ser visualizadas.

Mk 3 ou megacariócito formador de plaquetas ou megacariócito tardio:representa 20% das células do pool com 50-100µm de diâmetro, apresentan-do complexa lobulação nuclear (8-16 lóbulos) e núcleo denso de pequenas




dimensões. Há uma evidente demarcação do sistema de membranas, onde in-vaginações da membrana do megacariócito formam delicados canais preenchi-dos por glicoproteínas, com aspecto de grânulos, que se anastomosam e di-videm o citoplasma do megacariócito em territórios citoplasmáticos. O resul-tado desta anastomose é a fragmentação que ocorre ao longo desses canais,

com eliminação de material citoplasmático como plaquetas. No citoplasma háabundantes monômeros de tubulina e actinomiosina, na proporção de 100:1de actina/miosina. O megacariócito formador de plaquetas libera suas plaque-tas dentro de poucas horas (menos que 12 horas). A célula se aproxima dosinusóide central, alinhando-se ao endotélio, e emite expansões citoplasmáti-cas em fita que representam plaquetas conectadas, sendo lançadas indivi-dualizadas no interior da corrente sangüínea.

Plaqueta: corpúsculo com diâmetro que varia de 2,5 a 4µm, sendo anuclea-do nos mamíferos, contém grânulos azurófilos e grânulos secundários. Os grâ-nulos secundários podem ser do tipo alfa (fatores de coagulação e fator

mitogênico), beta (serotonina, um potente vasoconstritor) e denso (ADP ecálcio). O baço acumula, em condições normais, 1/3 do total de plaquetas dosangue. O trombócito é a denominação conferida às plaquetas nucleadas deoutros vertebrados, apresentando-se nucleado.

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06. Sangue e Hematopoiese