Aportaciones Dra Inés Fuentes Noriega

Lab 113, conjunto E, Facultad de Química UNAM

Introducción

• En el proyecto del desarrollo de un fármaco, actualmente se está dando importancia prioritaria al fármaco con propiedades específicas como un elemento integral del proyecto, estas propiedades de interés primordial incluyen:

• - Propiedades estructurales: Uniones hidrógeno, lipofilicidad, peso molecular, pKa, área superficial polar, forma y reactividad.

• - Propiedades fisicoquímicas: Solubilidad, permeabilidad y estabilidad química.

• - Propiedades bioquímicas: Metabolismo (fase I y II), uniones a tejido y proteínas y transporte (salida, eflujo).

• - Farmacocinética y toxicidad: Depuración, vida media, biodisponibilidad, interacción fármaco-fármaco y LD50.

•

• La estructura determina las propiedades del compuesto.

• Cuando esta estructura interactúa con el ambiente físico es a causa de sus propiedades fisicoquímicas (ejemplo, solubilidad) . Cuando esta estructura interactúa con las proteínas, es por causa de sus propiedades químicas (ejemplo, metabolismo).

• A un nivel más alto, cuando las propiedades fisicoquímicas y bioquímicas interactúan con sistemas vivos es por causa de su farmacocinética y toxicidad, y se puede controlar estas propiedades del compuesto al modificar su estructura.

• Se tendrá una mejor planeación, ejecución e interpretación de los experimentos a nivel de la clínica.

• Se reducirá el tiempo de investigación al conocer estas propiedades en relación a su actividad y estructura.

• El desarrollo farmacéutico será mas rápido y menos costoso, una vida de patente mas larga y una mejor aceptación hacia el paciente y mayor confianza en la seguridad y eficacia

Laboratorio de Biofarmacia

• En preclínica• Se realizan estudios de:

• Validación de metodología analítica (métodos espectrofotométrico y CLAR). NOM 177, 2013. FDA y OMS.

• Perfil de solubilidad – pH• Determinación de pKa por el método espectrofotométrico• Determinación del coeficiente de determinación octanol/sol. Amortiguadora de pH

7.4 • Cinética del compuesto in vitro: plasma/sangre total• Unión a proteínas por el método de ultrafiltración y diálisis al equilibrio.• Disolución intrínseca del compuesto a estudiar, por el método de Wood.• Estudios de permeabilidad en células MDCK y CaCo2. Colaboración con Dra Lena Ruiz• Farmacocinética preclínica. Colaboración con UNEXA.

Productos comerciales

• Perfiles de disolución aparente. Estudios en colaboración con empresas farmacéuticas.

Determinación de pka

DIALISIS AL EQUILIBRIO

Condiciones de diálisis al equilibrio

Extracción en plasma.

Celda de menor grosor: solución amortiguadora 0.064M

pH=7.4,

Celda de mayor grosor: muestra del f´rmaco en plasma

(humano o rata) o solución de albúmina al 4% o sol de alfa

glicoproteína

•Solución amortiguadora de fosfatos 0.064 M pH=7.4•Solución de albumina

•Solución de alfa-glicoproteína•Solución patrón del fármaco•Solución del fármaco en plasma

Preparación de soluciones

Cuantificación por algún métodoanalítico

Método por ultrafiltración

Se preparan soluciones del fármaco en albumina (45 mg/mL) , en -glicoproteína (1 mg/mL) y en plasma humano por triplicado cada una.

- Se colocan 0.5 mL de cada una en los cartuchos de ultrafiltración Nanospin 10,000 MWCO, se centrifugan por 30 minutos a 15 000 rpm y se toman 100 uL del ultrafiltrado para analizarlos por CLAR.

- Se corre una curva en el fluído correspondiente y se calculo la concentración del fármaco libre, de tal forma que la unida se calculó por:

Cunido = Ct - Clibre.

Técnica de ultrafiltración

Mezcla Introducción dentrode la unidad defiltrado

Aplicación de vacióa sequedad

Macrosoluto yligando

Obtención delligando permeablea la membrana

ESTUDIOS DEPERMEABILIDAD:Concentración inhibitoria 50 (CI50)

Proliferación celular Inocular células en placas tipo ELISA

Administrar Casiopeína ® III-ia

Fijar célulasTeñir con

sulforrodamina BExtraer el colorante

Analizar con un lector de

microplacas a 564 nm

Estudios de permeabilidad

Proliferar células Inocular en celdas

TranswellMedir resistencia

transepitelial

Según la dirección del ensayo, colocar la Casiopeína ® III-

ia

Muestrear en intervalos de 15

minutos

Verificar integridad de la membrana

Control de calidad de la membrana

Colocar en la parte apical Lucifer

yellow

Exponer el tiempo total del

experimento en las mismas condiciones

Muestrear

Leer en fluorometro

A 485nm de excitación y 538 nm de emisión

Si el paso del luciferyellow es mayor al

1% se rechaza

Métodos para determina la disolución intrínseca

• Método de la tableta suspendida

• Método del disco rotatorio

• Método del disco estático

• MÉTODO DE WOOD

Perfil general de disolución Intrínseca