Pewarnaan

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 1

MIKROBIOLOGI DASARSMK ANALIS KESEHATAN ASSA’ADAH


PEWARNAANKholis Amalia Nofianti


Tujuan

• Siswa dapat menjelaskan fungsi pewarnaan• Siswa dapat menjelaskan macam-macam

metode pewarnaan• Siswa dapat menjelaskan cara melakukan

pewarnaan




CARA PEMERIKSAAN KUMAN

• Living state– Kuman yang tidak bisa dicat– Kuman yg sulit dikembangbiakkan

• Fixed state


Tujuan Fiksasi

• Melekatkan spesimen pada objek glas• Membunuh kuman tanpa merubah morfologi• Sebagai intensifier sehingga kuman mudah

dicat• Menyimpan slide yang tak mudah dicat



Fungsi Pewarnaan

• Memberi warna pada sel-sel atau bagian-bagian lain, sehingga menambah daya kontras dan tampak jelas

• Menunjukkan struktur sel• Menunjukkan distribusi dan susunan kimia sel• Membedakan mikroba satu dengan lainnya


MACAM PEWARNAAN

Jumlah Pewarna

Pewarnaan simultan

2 pewarna atau lebih digunakan bersamaan

Pewenn Suksedan

pewarna digunakan 1 per 1 dan ada masa

pencucian

pH pewarna

Asam

Gugus kromofor anion

Mis.eosin, Fushin, acid Fushin, congo red

basa

Gugus kromofor kation

Mis. biru metilen, safranin, merah netral


MACAM-MACAM PEWARNAAN

Pengecatan negatif

Pewarnaan Sederhana

Pewarnaan Difrential

• Pengecatam Gram

• Pengecatan Ziehl-Nelson

• Pengecatan spora

• Pengecatan Kapsula

• Pengecatan Granula metakromatik

• Pengecatan Flagel


Pengecatan Negatif

Pengecatan tidak langsung

Pengecatan pada latar

belakang bakteri

Bakteri tidak dicat

Tanpa fiksasi

Menggunakan negrosin dan

tinta cina


Pengecatan sederhana

Untuk melihat bentuk bakteri

Menggunakan satu macam cat

Dilakukan fiksasi lebih dahulu

cat : metilen blue, gentian violet,basic fushin, safranin


PENGECATAN GRAM

Dikembangkan oleh ahli Histologi Christian Gram (1884)


Proses Pengecatan Gram

Pemberian cat utama• K

ristal violet (ungu)

Pengintensifan cat utama• L

ar.Mordan

Pencucian (Dekolorisasi)• L

ar. alkohol

Pemberiaan cat penutup (cat lawan)• S

afranin




Bakteri Gram positif

mengikat cat utama dengan kuat, sehingga tidak dapat dilunturkan

dan tidak dapat diwarnai oleh cat lawan

terdapat teichoic acid yang bersifat

antigenik dan polysacharida


Bakteri Gram Negatif

dapat dilunturkan mengikat cat tidak kuat, dan dapat diwarnai oleh cat lawan

mengandung 3 polimers yang terletak di luar peptidoglycan layer yaitu : lipo protein, outer membrane yang terdiri atas phospholipids dan lipopolysacharida (LPS) yang bertanggung jawab dalam produksi endotoksin




KESALAHAN-KESALAHAN DALAM PEWARNAAN GRAM


ARTEFAK

Presipitasi kristal violet disangka sebagai gram positif cocci


Presipitasi kristal violet disangka sebagai gram positif cocci


OVERDECOLORIZATION


Pengecatan Ziehl-Nelson(Pengecatan Tahan Asam)

Pemberian cat utama• F

uchin (merah)

Pengintensifan cat utama• P

anaskan pada penangas air, suhu 90 º C, 4’

Pencucian (Dekolorisasi)• L

ar. Alkohol asam (alkohol 95 % + HCl 5-10 %)

Pemberiaan cat penutup (cat lawan)• M

etilen blue atau berlian hijau


Pengecatan Ziehl-Nelson(Pengecatan Tahan Asam)

• Bakteri dari genus Mycobacterium (M. tubercolosis dan M. leprae) selnya dilapisi lilin

• Bersifat gram positif tapi sangat sukar di cat


PENGECATAN SPORA

• Spora sukar dicat• Perlu dilakukan pengecatan khusus dan

pemanasan• Metode : Schaefer Fulton dan modifikasi

tahan asam


PENGECATAN SPORA

• Fiksasi• Tuangi malachite green• Panaskan 5 ‘• Bilas air• Tuangi safranin• Bilas air• keringkan


PENGECATAN KAPSULA

• Kapsul tidak dapat dpwarnai• Ada banyak metode, mis. pengecatan negatif

dan pengecatan sederhana• Latar akan berwarna hitam, sedangkan badan

bakteri akan berwarna merah (fuchin)


Demo_Pewarnaan_Gram.mp4 [www.keepvid.com].mp4

Package

Performing a Gram Stain [www.keepvid.com].mp4

Endospore Stain Technique [www.keepvid.com].mp4


FEED BACK

• JELASKAN FUNGSI PEWARNAAN• SEBUTKAN MACAM-MACAM PEWARNAAN• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

GRAM ?• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

TAHAN ASAM• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

SPORA ?


Tugas

• Kerjakan secara berklompok• Tiap kelompok 2 orang, tidak boleh teman

sebangku• Dikerjakan di lembar kertas• Dikumpulkan minggu depan


Berdasarkan struktur tubuhnya, tentukan pewarnaan apa saja yang dibutuhkan untuk membuktikan adanya dugaan beberapa bakteri berikut :

• Staphlococcus aureus, • Klebsiela pneumonia, • Staphilococus coagulase negatif,

Mycobacterium tubercolosis, • E coli, Streptococus pneumonia, • Salmonela, Shigela, • Nisseria


SEMOGA BERMANFAATterimakasih

Education

Pewarnaan